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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组酿酒酵母转化子筛选的问题
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devil2006

木虫 (正式写手)

[求助] 重组酿酒酵母转化子筛选的问题

最近在做工业酿酒酵母的基因重组试验，请问如果没有筛选标记（比如卡纳，营养缺陷型等），对醋酸锂转化后长出的单菌落，利用菌落PCR盲筛，有没有可能筛选出正确的转化子？
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1楼 2011-08-01 13:37:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-11 12:02:55
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 很专业 2011-08-11 12:03:14
devil2006(金币+3): 谢谢你，真专业，我再研究研究 2011-08-11 15:21:41
用5-FOA筛尿嘧啶缺陷型，这个是最常用的做法了。
然后依次可以得到多重营养缺陷型。
如果是二倍体的话，可以用产孢子培养基分到单倍体，分别做缺陷型后实现特定的基因操作再mate。
这个是很常规的酿酒酵母操作方法。
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8楼2011-08-11 08:53:43
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天落smile

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sadc at 2013-03-26 21:02:57
一般是3倍体吧，理论上可以用3种抗性来消除的，但实际操作上不太具有可行性。最好是拆分成单倍体再操作，操作完了再mating。...

经过多次化转，得到了九株URA3缺陷型转化子，事实证明多倍体的啤酒酵母工业菌株也可以改造成缺陷型
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11楼2013-05-23 16:30:08
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普通回帖

jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

devil2006(金币+1): 谢谢，希望有好运气 2011-08-02 11:37:13
devil2006(金币+1): 2011-08-02 20:59:11
引用回帖:
1楼: Originally posted by devil2006 at 2011-08-01 13:37:11:
最近在做工业酿酒酵母的基因重组试验，请问如果没有筛选标记（比如卡纳，营养缺陷型等），对醋酸锂转化后长出的单菌落，利用菌落PCR盲筛，有没有可能筛选出正确的转化子？

理论上是可以的，但是几率比较小，看运气了，祝好运！
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2楼2011-08-01 13:44:54
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

devil2006(金币+1): 谢谢。可是实在不能使用抗性标记的时候如何筛选转化子呢？ 2011-08-02 21:22:39
这是不可能的，虽然理论上有可行性。
用抗性之类的很方便的啊。
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3楼2011-08-02 21:03:00
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sadc

木虫 (正式写手)
你是指什么情况下？为什么不能用抗性？
说的具体一点，好帮你分析下。
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4楼2011-08-07 19:24:50
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longage.gene

银虫 (小有名气)
估计楼主的菌适用于食品，所以不想有抗性在中
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5楼2011-08-08 11:46:41
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devil2006

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sadc at 2011-08-07 19:24:50:
你是指什么情况下？为什么不能用抗性？
说的具体一点，好帮你分析下。

正如5楼所说，我要改造的菌种是要应用于食品中的工业菌株，所以不能用抗性标记，你有好的主意么，帮帮忙
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6楼2011-08-08 15:59:37
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 12:27:15
devil2006(金币+1): 可是工业菌株没有营养缺陷型，真是不知该如何筛选了 2011-08-10 10:48:50
可以用尿嘧啶这些营养缺陷型，很好做的。
可以查self-cloning。
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7楼2011-08-09 07:57:47
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天落smile

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1138834楼: Originally posted by sadc at 2011-08-11 08:53:43
用5-FOA筛尿嘧啶缺陷型，这个是最常用的做法了。
然后依次可以得到多重营养缺陷型。
如果是二倍体的话，可以用产孢子培养基分到单倍体，分别做缺陷型后实现特定的基因操作再mate。
这个是很常规的酿酒酵母操作方 ...

用于啤酒酿造的URA3缺陷工业啤酒酵母菌株是多倍体，并且不生孢没法得到单倍体，可以构建营养缺陷型吗？谢谢。
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9楼2013-03-26 17:02:27
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1694079楼: Originally posted by 天落smile at 2013-03-26 17:02:27
用于啤酒酿造的URA3缺陷工业啤酒酵母菌株是多倍体，并且不生孢没法得到单倍体，可以构建营养缺陷型吗？谢谢。...

一般是3倍体吧，理论上可以用3种抗性来消除的，但实际操作上不太具有可行性。最好是拆分成单倍体再操作，操作完了再mating。
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10楼2013-03-26 21:02:57
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