应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酿酒酵母转化建立突变库
141/2返回列表12下一页
查看: 2399  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wuguangxia

银虫 (初入文坛)

[交流] 酿酒酵母转化建立突变库 已有4人参与

各位虫友们好！有没有最近做酵母转化的，我想向各位大虾请教一下。
我最近做酵母转化这一块，但是需要很高的转化效率，达到一定的库容才行，也就是说建立一个突变文库，有没有人做过用连接产物直接转化酿酒酵母感受态的？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-06 19:18:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lina_chai

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
有，可以直接转化的
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-09-16 10:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuguangxia

银虫 (初入文坛)
哦 ，那你做过直接转化的么？或者看到别人做过吗，可不可以给我说一下啊谢谢你
赞一下 回复此楼
3楼2011-09-18 20:21:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lina_chai

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我做过的！与质粒转化酵母细胞的操作是不一样的！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-19 10:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-09-27 17:53:24
连接产物先转DH5a，涂板后把板上的菌落全部收集小提质粒，再转酵母感受态~连接产物直接转酵母的话转化率达不到~~楼主做Directed evolution哈~
赞一下(2人) 回复此楼
仕不可不弘毅，任重而道远
5楼2011-09-19 11:10:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuguangxia

银虫 (初入文坛)
谢谢lina_chai ！
是的，老板让我做DNA Shuffling，都做了1年了，费劲巴拉的算是把基因改组完了，这不现在需要用酵母缺陷型菌来进行高通量筛选，看过别人的一篇论文是连接产物直接转化 酵母感受态来建立突变库的，但是我一直没做出来。连接产物先转DH5a，然后用无菌水洗下提质粒，再转化酵母感受态，但是只长出几十个菌落，还是达不到库容，不晓得哪里不对
希望大家踊跃参与讨论，共同进步！
赞一下 回复此楼
6楼2011-09-21 21:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tingl0087

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我想问一下各位大侠怎么制备酵母感受态的啊？为什么我每次转化都没有菌落出现。。。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-09-21 22:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuguangxia

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 感谢参与 2011-09-27 17:08:16
l)实验开始前两天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5mlYPD培养基中，30℃振荡培养过夜。
2)前一天晚上，取适量(5微升左右)的过夜培养液接种到30m1YPAD培养基，30℃振荡培养过夜，到细胞密度为 1x10，细胞/m1(0D60 =0.3一0.5)。为获得更高的转化效率，可用YPAD稀释培养液至细胞密度为  2x106细胞/m1，培养2~4h。
3)取1.2ml培养液在室温下3000g离心lmin，收集细胞。细胞用lml无菌水重
悬，室温下3000g离心lmin，沉淀细胞。
4)细胞用lml铿盐溶液(1体积10xTE缓冲液，1体积10x乙酸铿贮液，8体
积无菌超纯水，现配现用)重悬。
5)室温下3000g离心lmin，去上清，重新用0.2ml铿盐溶液重悬细胞，感受态
制备完毕。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-09-22 09:54:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuguangxia

银虫 (初入文坛)
你可以做个对照，感受态细胞不加质粒转化涂板看看长不长
赞一下 回复此楼
9楼2011-09-22 09:55:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuguangxia

银虫 (初入文坛)
有人做过用半乳糖作为碳源来诱导酿酒酵母表达的吗？
40%半乳糖我配了之后怎么不溶呢，能高压灭菌吗？
赞一下 回复此楼
10楼2011-09-26 20:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuguangxia 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 349学科化学045106求调剂，化学类都可以 +5 保好懂懂 2026-04-08 5/250 2026-04-08 23:32 by cheerful9622
[考研] 机械专硕273请求调剂 +6 庚申壬申 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:41 by bljnqdcc
[考研] 277求调剂 +16 倪建设 2026-04-06 16/800 2026-04-08 21:28 by zhouxiaoyu
[考研] 土木水利专硕276分求调剂 +6 我想上学！！6 2026-04-05 9/450 2026-04-08 17:45 by 宋小宝HQ
[考研] 275求调剂 +4 1624447980 2026-04-08 5/250 2026-04-08 15:29 by 哦哦123
[硕博家园] 有没有学校材料专业收跨调(一志愿085410) +3 momo(上岸版) 2026-04-06 6/300 2026-04-08 14:53 by 化学521
[考研] 304求调剂 +10 素年祭语 2026-04-06 17/850 2026-04-08 09:05 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +4 mcbbc 2026-04-06 5/250 2026-04-07 12:33 by upczlm1989
[考研] 0703化学 +9 goldtt 2026-04-02 11/550 2026-04-06 10:35 by 无际的草原
[考研] 生物与医药086000调剂一志愿西北农林320分 +3 美美女士 2026-04-03 3/150 2026-04-05 21:55 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿9材料学硕297已过六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-04-04 12/600 2026-04-05 19:04 by 蓝云思雨
[考研] 277求调剂 +5 考研调剂lxh 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:03 by chy09050039
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 求调剂 +4 晟功? 2026-04-03 4/200 2026-04-04 21:58 by hemengdong
[考研] 280求调剂 +21 咕噜晓晓 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 11:12 by 猪会飞
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 机械专硕297 +3 Afksy 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:24 by 1753564080
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭