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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酿酒酵母转化建立突变库
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wuguangxia

银虫 (初入文坛)

[交流] 酿酒酵母转化建立突变库已有4人参与

各位虫友们好！有没有最近做酵母转化的，我想向各位大虾请教一下。
我最近做酵母转化这一块，但是需要很高的转化效率，达到一定的库容才行，也就是说建立一个突变文库，有没有人做过用连接产物直接转化酿酒酵母感受态的？？？
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1楼2011-09-06 19:18:56
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★ ★
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lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-09-27 17:53:24
连接产物先转DH5a，涂板后把板上的菌落全部收集小提质粒，再转酵母感受态~连接产物直接转酵母的话转化率达不到~~楼主做Directed evolution哈~
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仕不可不弘毅，任重而道远
5楼2011-09-19 11:10:55
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
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引用回帖:
13楼: Originally posted by wuguangxia at 2012-02-27 11:00:32:
还是想请教你几个问题。连接产物转化DH5a后，转化子不是很多，也就50个左右，这样是达不到库容的，把这些转化子水洗后提质粒，用质粒再转化酵母后，长出来的酵母转化子可能不止是50个左右，我的意思是说只是用一 ...

你的有道理，但是问题不在此。关键在于库容量太小，你分别转化酵母也没什么意义，当然更不能一起转化。现在要解决的是增加库容量，即提高连接转化后转化效率，即转化子数。可能还是基本操作上有问题，例如酶切不完全 连接效率 还有感受态的问题  从源头去解决 good luck~
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仕不可不弘毅，任重而道远
14楼2012-02-27 13:02:30
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