酿酒酵母转化建立突变库 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2012-02-15 20:21:55

wuguangxia

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楼: Originally posted by lina_chai at 2011-09-19 10:01:52:
我做过的！与质粒转化酵母细胞的操作是不一样的！

你做过的连接产物直接转化酵母的操作是怎么样的啊？能详细说说么？转化后的转化子多吗？非常感谢！

12楼2012-02-27 10:12:55

wuguangxia

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楼: Originally posted by 墨香若水 at 2011-09-19 11:10:55:
连接产物先转DH5a，涂板后把板上的菌落全部收集小提质粒，再转酵母感受态~连接产物直接转酵母的话转化率达不到~~楼主做Directed evolution哈~

还是想请教你几个问题。连接产物转化DH5a后，转化子不是很多，也就50个左右，这样是达不到库容的，把这些转化子水洗后提质粒，用质粒再转化酵母后，长出来的酵母转化子可能不止是50个左右，我的意思是说只是用一种基因的质粒转化酵母也会长出一满板。如果是质粒的混合物转化酵母，也长出许多，就更增加了我验证筛选的工作量，可能好几个酵母转化子都是同一个质粒。还不如把50个DH5a转化子分别提质粒后再转分别转酵母。

13楼2012-02-27 11:00:32

墨香若水

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13楼: Originally posted by wuguangxia at 2012-02-27 11:00:32:
还是想请教你几个问题。连接产物转化DH5a后，转化子不是很多，也就50个左右，这样是达不到库容的，把这些转化子水洗后提质粒，用质粒再转化酵母后，长出来的酵母转化子可能不止是50个左右，我的意思是说只是用一 ...

你的有道理，但是问题不在此。关键在于库容量太小，你分别转化酵母也没什么意义，当然更不能一起转化。现在要解决的是增加库容量，即提高连接转化后转化效率，即转化子数。可能还是基本操作上有问题，例如酶切不完全连接效率还有感受态的问题从源头去解决 good luck~

仕不可不弘毅，任重而道远

14楼2012-02-27 13:02:30