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jzyzqbx

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问学长,能直接转酿酒酵母吗?电转还是化转效率高呢?
11楼2012-02-15 20:21:55
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wuguangxia

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by lina_chai at 2011-09-19 10:01:52:
我做过的!与质粒转化酵母细胞的操作是不一样的!

你做过的连接产物直接转化酵母的操作是怎么样的啊?能详细说说么?转化后的转化子多吗?非常感谢!
12楼2012-02-27 10:12:55
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wuguangxia

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by 墨香若水 at 2011-09-19 11:10:55:
连接产物先转DH5a,涂板后把板上的菌落全部收集小提质粒,再转酵母感受态~连接产物直接转酵母的话转化率达不到~~楼主做Directed evolution哈~

还是想请教你几个问题。连接产物转化DH5a后,转化子不是很多,也就50个左右,这样是达不到库容的,把这些转化子水洗后提质粒,用质粒再转化酵母后,长出来的酵母转化子可能不止是50个左右,我的意思是说只是用一种基因的质粒转化酵母也会长出一满板。如果是质粒的混合物转化酵母,也长出许多,就更增加了我验证筛选的工作量,可能好几个酵母转化子都是同一个质粒。还不如把50个DH5a转化子分别提质粒后再转分别转酵母。
13楼2012-02-27 11:00:32
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by wuguangxia at 2012-02-27 11:00:32:
还是想请教你几个问题。连接产物转化DH5a后,转化子不是很多,也就50个左右,这样是达不到库容的,把这些转化子水洗后提质粒,用质粒再转化酵母后,长出来的酵母转化子可能不止是50个左右,我的意思是说只是用一 ...

你的有道理,但是问题不在此。关键在于库容量太小,你分别转化酵母也没什么意义,当然更不能一起转化。现在要解决的是增加库容量,即提高连接转化后转化效率,即转化子数。可能还是基本操作上有问题,例如酶切不完全 连接效率 还有感受态的问题  从源头去解决 good luck~
仕不可不弘毅,任重而道远
14楼2012-02-27 13:02:30
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