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wuguangxia

银虫 (初入文坛)

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[交流] 酿酒酵母转化建立突变库已有4人参与

各位虫友们好！有没有最近做酵母转化的，我想向各位大虾请教一下。
我最近做酵母转化这一块，但是需要很高的转化效率，达到一定的库容才行，也就是说建立一个突变文库，有没有人做过用连接产物直接转化酿酒酵母感受态的？？？

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1楼 2011-09-06 19:18:56

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wuguangxia

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引用回帖:

楼: Originally posted by 墨香若水 at 2011-09-19 11:10:55:
连接产物先转DH5a，涂板后把板上的菌落全部收集小提质粒，再转酵母感受态~连接产物直接转酵母的话转化率达不到~~楼主做Directed evolution哈~

还是想请教你几个问题。连接产物转化DH5a后，转化子不是很多，也就50个左右，这样是达不到库容的，把这些转化子水洗后提质粒，用质粒再转化酵母后，长出来的酵母转化子可能不止是50个左右，我的意思是说只是用一种基因的质粒转化酵母也会长出一满板。如果是质粒的混合物转化酵母，也长出许多，就更增加了我验证筛选的工作量，可能好几个酵母转化子都是同一个质粒。还不如把50个DH5a转化子分别提质粒后再转分别转酵母。