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bulebird金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】求助酿酒酵母转化已有3人参与
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我在实验过程中遇到的问题是：转化A+KanMX+B这个片段进入酿酒酵母基因组（A,B片段分别是酿酒酵母X基因外部上下游约500bp的同源区），得到X基因缺失的转化子。重组后一方面将KanMX基因引入酵母染色体，使重组菌株产生G418抗性；另一方面，KanMX片段同源重组替换了酵母染色体上的X基因，从而实现该基因的敲除。 用抗性基因的上下游引物扩增转化子能正确扩增KanMX抗性基因大小的片段，但是在X基因外部和KanMX抗性基因内部设计的一对引物扩增，始终没有扩增出来（应该不是PCR的问题）。我怀疑是转化过程遇到了问题，导致的假阳性。 想请教酿酒酵母电转化的方法，及一些注意事项。 如果哪位虫友知道某个研究所或企业能做这方面的实验，向我介绍一下。合作也可以。 谢谢！！！ |
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