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tongxinkxy

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[交流] 【求助/交流】酵母表达和原核表达，在技术上有什么不同？已有5人参与

是否也可以用氯化钙法制作感受态？
是否可以和大肠杆菌一样的摇床培养条件？

除培养基不同外，还有什么不同啊
请指教

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1楼2011-01-01 13:20:53

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susizheng

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 2011-01-01 16:50:50

酵母表达，与原核表达，操作上的区别在于：表达载体构建好后，有一个线性化表达载体并整合进酵母染色体的过程。（当然酿酒酵母液有负载型表达载体，不需要整合）
培养条件上与大肠杆菌相比，温度最适时30℃，而大肠是37℃。另外酵母对氧气的需求也比大肠高，因此摇床转速一般设置为200-250 rpm，而大肠我们通常只需要150 rpm就够了。
由于酵母细胞壁较厚，因此普通化学转化转化率太低，因此酵母一般采用电转的方法。由于电转是，盐离子浓度不能太高（否则有爆杯的可能），因此感受态一般采用山梨醇制备，不用氯化钙。

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Thank-you，so-blue.

2楼2011-01-01 13:42:23

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tongxinkxy

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引用回帖:

Originally posted by susizheng at 2011-01-01 13:42:23:
酵母表达，与原核表达，操作上的区别在于：表达载体构建好后，有一个线性化表达载体并整合进酵母染色体的过程。（当然酿酒酵母液有负载型表达载体，不需要整合）
培养条件上与大肠杆菌相比，温度最适时30℃，而大 ...

请问酵母表达的成本呢比原核表达多吗?
在载体和菌株都有的前提下

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3楼2011-01-01 13:47:35

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