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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

[求助] 原核表达问题

一个真核生物的基因做原核表达,用总DNA做为模板做PCR可行吗?
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匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+3): good!很专业哦 2012-01-31 08:13:37
西瓜(金币+2, MolEPI+1): 通俗易懂哈~ 2012-01-31 11:37:15
本帖仅楼主可见
5楼2012-01-30 09:29:07
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普通回帖

我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2012-01-29 22:28:56
应该可以 不过P出来的肯定要测序确定才行 我们都是用cDNA
2楼2012-01-29 18:10:58
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): Good! 2012-01-29 22:29:11
如果有这个内含子的话肯定不行。
静心做事。
3楼2012-01-29 21:59:47
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cnliu51

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该说肯定不行,绝大多数基因有内含子。
4楼2012-01-30 06:58:20
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没这样做过 因为真核基因多数都有内含子,你可以提取RNA做翻转,克隆真核基因。
6楼2012-01-30 09:49:19
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
本人现在正在做真核基因的表达,就是通过提RNA反转录PCR来扩增的。用DNA也P过,有好几段内含子序列
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
7楼2012-01-30 10:01:52
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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 赞同哦 2012-01-31 08:14:24
正如其他虫子说的,先要看是什么基因,来自植物、动物、病毒......,如果质粒上恰好是完整的基因,应该可以直接用来做PCR的模板,如果是其他情况就要另外考虑了。你的问题没有说清具体情况。
8楼2012-01-30 11:53:05
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chenhuize

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还是反转录成cDNA最好。
9楼2012-01-31 00:12:34
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bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+3): Good! 2012-01-31 12:04:13
可以先查一下基因的序列,要是没有内含子,理论上是可以的,但是基因组做模板太大了,会有很多非特异的扩增,除非你的引物很好。所以建议还是提RNA,反转,再PCR吧,祝好运!
10楼2012-01-31 10:40:58
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