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mafangfang7131

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达

最近进行原核表达,用的Pet-hisGFP载体,目的蛋白(80Kda)有微量表达,同时一直有GFP(33Kda)蛋白伴随表达,是目的蛋白没有融合么,还是融合蛋白表达的同时就会有GFP的蛋白表达啊?后来经过条件优化,纯化后GFP蛋白大量表达,而我的目的蛋白则没有表达,是质粒丢失吗?每次表达都需重新转BL21表达载体吗?郁闷啊,请求高人指点。
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ProperLevelsofthelife
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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wanhscn(金币+5): 辛苦! 2012-01-01 13:42:07
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:47:00
可能是克隆的策略出问题了,再检查下当时的实验设计,考虑下阅读框、起始密码子和终止密码子的问题吧。
祝新年快乐哈~
2楼2012-01-01 11:31:30
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:46:54
看看 你的阅读框架移码没有
3楼2012-01-01 18:12:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:46:47
如果真的是你说的,要么是你的目的基因没融合上去,要么融合上了但形成的ORF有问题。两者都是克隆上出的问题。
4楼2012-01-01 21:31:47
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mafangfang7131

金虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 西瓜 at 2012-01-01 11:31:30:
可能是克隆的策略出问题了,再检查下当时的实验设计,考虑下阅读框、起始密码子和终止密码子的问题吧。
祝新年快乐哈~

谢谢!呵呵 新年快乐!!
ProperLevelsofthelife
5楼2012-01-02 16:19:53
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)

您好,想问一下GFP蛋白如和纯化?我这里有一个融合了GFP的蛋白,但是不知道如何纯化,还请指教
6楼2017-10-23 08:46:16
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