应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达
61/1返回列表
查看: 1258  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mafangfang7131

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达

最近进行原核表达，用的Pet-hisGFP载体，目的蛋白（80Kda）有微量表达，同时一直有GFP（33Kda）蛋白伴随表达，是目的蛋白没有融合么，还是融合蛋白表达的同时就会有GFP的蛋白表达啊？后来经过条件优化，纯化后GFP蛋白大量表达，而我的目的蛋白则没有表达，是质粒丢失吗？每次表达都需重新转BL21表达载体吗？郁闷啊，请求高人指点。
回复此楼

» 猜你喜欢
ProperLevelsofthelife
1楼 2012-01-01 10:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+5): 辛苦！ 2012-01-01 13:42:07
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:47:00
可能是克隆的策略出问题了，再检查下当时的实验设计，考虑下阅读框、起始密码子和终止密码子的问题吧。
祝新年快乐哈~
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-01-01 11:31:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

脱水拂空

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:46:54
看看 你的阅读框架移码没有
赞一下 回复此楼
3楼2012-01-01 18:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:46:47
如果真的是你说的，要么是你的目的基因没融合上去，要么融合上了但形成的ORF有问题。两者都是克隆上出的问题。
赞一下 回复此楼
4楼2012-01-01 21:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafangfang7131

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-01-01 11:31:30:
可能是克隆的策略出问题了，再检查下当时的实验设计，考虑下阅读框、起始密码子和终止密码子的问题吧。
祝新年快乐哈~

谢谢！呵呵 新年快乐！！
赞一下 回复此楼
ProperLevelsofthelife
5楼2012-01-02 16:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极北小白熊

铁虫 (正式写手)
您好，想问一下GFP蛋白如和纯化？我这里有一个融合了GFP的蛋白，但是不知道如何纯化，还请指教
赞一下 回复此楼
6楼2017-10-23 08:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mafangfang7131 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:46 by xiangy672
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 能否申诉？ +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭