应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达
51/1返回列表
查看: 1304  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mafangfang7131

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达

最近进行原核表达，用的Pet-hisGFP载体，目的蛋白（80Kda）有微量表达，同时一直有GFP（33Kda）蛋白伴随表达，是目的蛋白没有融合么，还是融合蛋白表达的同时就会有GFP的蛋白表达啊？后来经过条件优化，纯化后GFP蛋白大量表达，而我的目的蛋白则没有表达，是质粒丢失吗？每次表达都需重新转BL21表达载体吗？郁闷啊，请求高人指点。
回复此楼

» 猜你喜欢
ProperLevelsofthelife
1楼 2012-01-01 10:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极北小白熊

铁虫 (正式写手)
您好，想问一下GFP蛋白如和纯化？我这里有一个融合了GFP的蛋白，但是不知道如何纯化，还请指教
赞一下 回复此楼
6楼2017-10-23 08:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+5): 辛苦！ 2012-01-01 13:42:07
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:47:00
可能是克隆的策略出问题了，再检查下当时的实验设计，考虑下阅读框、起始密码子和终止密码子的问题吧。
祝新年快乐哈~
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-01-01 11:31:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

脱水拂空

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:46:54
看看 你的阅读框架移码没有
赞一下 回复此楼
3楼2012-01-01 18:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:46:47
如果真的是你说的，要么是你的目的基因没融合上去，要么融合上了但形成的ORF有问题。两者都是克隆上出的问题。
赞一下 回复此楼
4楼2012-01-01 21:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭