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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达
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mafangfang7131

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达

最近进行原核表达，用的Pet-hisGFP载体，目的蛋白（80Kda）有微量表达，同时一直有GFP（33Kda）蛋白伴随表达，是目的蛋白没有融合么，还是融合蛋白表达的同时就会有GFP的蛋白表达啊？后来经过条件优化，纯化后GFP蛋白大量表达，而我的目的蛋白则没有表达，是质粒丢失吗？每次表达都需重新转BL21表达载体吗？郁闷啊，请求高人指点。
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ProperLevelsofthelife
1楼 2012-01-01 10:41:57
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+5): 辛苦！ 2012-01-01 13:42:07
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:47:00
可能是克隆的策略出问题了，再检查下当时的实验设计，考虑下阅读框、起始密码子和终止密码子的问题吧。
祝新年快乐哈~
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2楼2012-01-01 11:31:30
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:46:54
看看 你的阅读框架移码没有
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3楼2012-01-01 18:12:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mafangfang7131(金币+1): 2012-01-02 14:46:47
如果真的是你说的，要么是你的目的基因没融合上去，要么融合上了但形成的ORF有问题。两者都是克隆上出的问题。
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4楼2012-01-01 21:31:47
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mafangfang7131

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-01-01 11:31:30:
可能是克隆的策略出问题了，再检查下当时的实验设计，考虑下阅读框、起始密码子和终止密码子的问题吧。
祝新年快乐哈~

谢谢！呵呵 新年快乐！！
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ProperLevelsofthelife
5楼2012-01-02 16:19:53
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
您好，想问一下GFP蛋白如和纯化？我这里有一个融合了GFP的蛋白，但是不知道如何纯化，还请指教
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6楼2017-10-23 08:46:16
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