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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母表达和原核表达，在技术上有什么不同？
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酵母表达和原核表达，在技术上有什么不同？ 已有5人参与

是否也可以用氯化钙法制作感受态？
是否可以和大肠杆菌一样的摇床培养条件？

除培养基不同外，还有什么不同啊
请指教
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1楼 2011-01-01 13:20:53
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2011-01-01 16:50:50
酵母表达，与原核表达，操作上的区别在于：表达载体构建好后，有一个线性化表达载体并整合进酵母染色体的过程。（当然酿酒酵母液有负载型表达载体，不需要整合）
培养条件上与大肠杆菌相比，温度最适时30℃，而大肠是37℃。另外酵母对氧气的需求也比大肠高，因此摇床转速一般设置为200-250 rpm，而大肠我们通常只需要150 rpm就够了。
由于酵母细胞壁较厚，因此普通化学转化转化率太低，因此酵母一般采用电转的方法。由于电转是，盐离子浓度不能太高（否则有爆杯的可能），因此感受态一般采用山梨醇制备，不用氯化钙。
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-01-01 13:42:23
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-01-01 13:42:23:
酵母表达，与原核表达，操作上的区别在于：表达载体构建好后，有一个线性化表达载体并整合进酵母染色体的过程。（当然酿酒酵母液有负载型表达载体，不需要整合）
培养条件上与大肠杆菌相比，温度最适时30℃，而大 ...

请问酵母表达的成本呢比原核表达多吗?
在载体和菌株都有的前提下
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3楼2011-01-01 13:47:35
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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dhd997(金币+2):good，希望你继续加油哦，这几天出台下次VIP奖励制度 2011-01-01 21:22:41
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2011-01-01 13:47:35:

请问酵母表达的成本呢比原核表达多吗?
在载体和菌株都有的前提下

看你所用的筛选标记吧，如果仅仅用氨基酸缺陷型筛选标记筛重组子还一般，但是要是用抗生素筛选多拷贝的话，比如G418啊，Zeocin啊，普遍比原核所用抗生素贵很多，而且用的浓度高，那成本肯定要高一些了。
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Thank-you，so-blue.
4楼2011-01-01 14:08:35
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-01 22:34:25
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2011-01-01 13:47:35:

请问酵母表达的成本呢比原核表达多吗?
在载体和菌株都有的前提下

筛选成本更高，表达的过程时间长多了，能用原核表达完成的建议尽量用原核表达。
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5楼2011-01-01 18:26:31
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3):谢谢交流 2011-01-02 13:17:50
酵母的转化，有化学法和电转化两种，如果你就是一个普通的质粒，化学法足以。但不是用氯化钙法做感受态的。
培养基很不一样，需要考虑你使用的promoter，你的菌的缺陷型，不同的碳源等等。成本不能简单的说，毕竟很多的蛋白原核无法可容或正确折叠。
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6楼2011-01-01 22:54:27
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

学习啦~
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7楼2011-02-21 10:25:39
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