应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 1949  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？

采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量，10孔小胶：270uL/（样品浓缩系数*OD600），可是我是从OD600为0.638开始诱导的，菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬，样品浓缩系数为5，按这样算下来我的上样量为86微升，弱弱的问一下，10孔小胶的一个胶孔中能上这么多样吗？
还有大家诱导以后是怎么确定上样量的啊？本人新手，也没人知道，只能在这儿求教各位了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-08-27 10:39:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-27 10:39:47:
采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量，10孔小胶：270uL/（样品浓缩系数*OD600），可是我是从OD600为0.638开始诱导的，菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬，样品浓缩系数为5，按 ...

补充一下，按上面的公式算下来，我最小的上样量是诱导5h以后的，为22.64微升。
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-27 10:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶心飞翔

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
friya0910(金币+2): 2011-08-27 12:47:47
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-28 09:47:01
一般小孔上样量不超过20微，如果是22.64，应该差不多，86微太多了
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-08-27 12:21:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 叶心飞翔 at 2011-08-27 12:21:22:
一般小孔上样量不超过20微，如果是22.64，应该差不多，86微太多了

可我就是按照那个公式算的，因为随着培养时间的延长，菌液浓度增大，如果都上一样的量的话，那就不能看出蛋白的表达量的变化趋势了啊!
赞一下 回复此楼
4楼2011-08-27 12:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶心飞翔

银虫 (小有名气)
★
friya0910(金币+1): 2011-08-28 14:41:11
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-28 16:53:48
引用回帖:
4楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-26 16:57:53:
可我就是按照那个公式算的，因为随着培养时间的延长，菌液浓度增大，如果都上一样的量的话，那就不能看出蛋白的表达量的变化趋势了啊!

你在摸索条件吗？你可以缩小相同的倍数，这样也具有可比性。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-08-27 18:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
西瓜: 摸索条件时不必太纠结，做就是啦 2011-08-28 16:55:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by 叶心飞翔 at 2011-08-27 18:32:18:
你在摸索条件吗？你可以缩小相同的倍数，这样也具有可比性。

是的，我也这么打算的，跑跑看吧！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-08-28 14:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+5): good 2011-08-29 07:37:41
friya0910(金币+2): 2011-08-29 08:48:13
看了半天没有看懂你所说的计算方法，现在我来说一个比较简单的方法吧.
原核表达SDS-PAGE样品制做时，浓缩到A600=20左右可以获得比好的电泳结果，下面以5xloading buffer为例来说一下：
如果你的菌液A600长到了4.0，取发酵液1ml，12000rpm离心2min，弃上清800ul，余下的吹系均匀，取20ul，加5ul 5xloading buffer，沸水浴5分钟，12000rpm离心2min，上清即可做为电泳样品，大孔胶时上样10ul，小孔胶时上样5ul，只要没有其它的问题，保证你会得到一张很好的电泳结果
赞一下(3人) 回复此楼
7楼2011-08-29 00:57:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
梦想天行8楼
2016-10-16 21:32   回复  
friya0910(金币+1): 谢谢参与
， 发自小木虫Android客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 friya0910 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 求调剂 +4 wos666 2026-04-03 4/200 2026-04-05 11:48 by arrow8852
[考研] 359求调剂22408 +3 123456789qw 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:09 by zhq0425
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-04 4/200 2026-04-05 09:44 by zhq0425
[考研] 285求调剂 +11 哦呦呼o 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:15 by 544594351
[考研] 一志愿北京化工大学，初试成绩350求调剂 +9 沿岸?贝壳 2026-04-04 14/700 2026-04-05 01:09 by 沿岸?贝壳
[考研] 320分人工智能调剂 +7 振—TZ 2026-04-03 7/350 2026-04-05 00:42 by chongya
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 可跨专业调剂 +3 周的得地 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:21 by barlinike
[考研] 求生物学调剂 +14 15172915737 2026-04-01 14/700 2026-04-04 20:13 by babysonlkd
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] 085601一志愿北理325分求调剂 +6 找调剂，， 2026-04-02 6/300 2026-04-03 22:20 by 柟�?
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 生物学求调剂 +3 15064154688 2026-04-03 3/150 2026-04-03 10:28 by macy2011
[考研] 330求调剂 +3 白神呜呼呼 2026-04-02 3/150 2026-04-03 10:15 by 蓝云思雨
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 120+4 Yishengeryi 2026-03-30 6/300 2026-04-02 17:19 by Yishengeryi
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 261求B区调剂 +5 明仔· 2026-04-01 7/350 2026-04-02 11:17 by 邹尉尉
[考研] 262求调剂 +7 ZZ..000 2026-03-30 8/400 2026-03-31 10:05 by cal0306
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭