应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
81/1返回列表
查看: 1905  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？

采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量，10孔小胶：270uL/（样品浓缩系数*OD600），可是我是从OD600为0.638开始诱导的，菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬，样品浓缩系数为5，按这样算下来我的上样量为86微升，弱弱的问一下，10孔小胶的一个胶孔中能上这么多样吗？
还有大家诱导以后是怎么确定上样量的啊？本人新手，也没人知道，只能在这儿求教各位了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-08-27 10:39:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-27 10:39:47:
采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量，10孔小胶：270uL/（样品浓缩系数*OD600），可是我是从OD600为0.638开始诱导的，菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬，样品浓缩系数为5，按 ...

补充一下，按上面的公式算下来，我最小的上样量是诱导5h以后的，为22.64微升。
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-27 10:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶心飞翔

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
friya0910(金币+2): 2011-08-27 12:47:47
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-28 09:47:01
一般小孔上样量不超过20微，如果是22.64，应该差不多，86微太多了
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-08-27 12:21:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 叶心飞翔 at 2011-08-27 12:21:22:
一般小孔上样量不超过20微，如果是22.64，应该差不多，86微太多了

可我就是按照那个公式算的，因为随着培养时间的延长，菌液浓度增大，如果都上一样的量的话，那就不能看出蛋白的表达量的变化趋势了啊!
赞一下 回复此楼
4楼2011-08-27 12:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶心飞翔

银虫 (小有名气)
★
friya0910(金币+1): 2011-08-28 14:41:11
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-28 16:53:48
引用回帖:
4楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-26 16:57:53:
可我就是按照那个公式算的，因为随着培养时间的延长，菌液浓度增大，如果都上一样的量的话，那就不能看出蛋白的表达量的变化趋势了啊!

你在摸索条件吗？你可以缩小相同的倍数，这样也具有可比性。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-08-27 18:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
西瓜: 摸索条件时不必太纠结，做就是啦 2011-08-28 16:55:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by 叶心飞翔 at 2011-08-27 18:32:18:
你在摸索条件吗？你可以缩小相同的倍数，这样也具有可比性。

是的，我也这么打算的，跑跑看吧！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-08-28 14:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+5): good 2011-08-29 07:37:41
friya0910(金币+2): 2011-08-29 08:48:13
看了半天没有看懂你所说的计算方法，现在我来说一个比较简单的方法吧.
原核表达SDS-PAGE样品制做时，浓缩到A600=20左右可以获得比好的电泳结果，下面以5xloading buffer为例来说一下：
如果你的菌液A600长到了4.0，取发酵液1ml，12000rpm离心2min，弃上清800ul，余下的吹系均匀，取20ul，加5ul 5xloading buffer，沸水浴5分钟，12000rpm离心2min，上清即可做为电泳样品，大孔胶时上样10ul，小孔胶时上样5ul，只要没有其它的问题，保证你会得到一张很好的电泳结果
赞一下(3人) 回复此楼
7楼2011-08-29 00:57:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
梦想天行8楼
2016-10-16 21:32   回复  
friya0910(金币+1): 谢谢参与
， 发自小木虫Android客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 friya0910 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 293求调剂 +5 世界首富 2026-03-11 5/250 2026-03-17 10:16 by Sammy2
[考研] 268求调剂 +5 好运连绵不绝 2026-03-12 5/250 2026-03-17 10:12 by Sammy2
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭