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[交流]
原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定?
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采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量,10孔小胶:270uL/(样品浓缩系数*OD600),可是我是从OD600为0.638开始诱导的,菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬,样品浓缩系数为5,按这样算下来我的上样量为86微升,弱弱的问一下,10孔小胶的一个胶孔中能上这么多样吗? 还有大家诱导以后是怎么确定上样量的啊?本人新手,也没人知道,只能在这儿求教各位了! |
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2楼2011-08-27 10:40:58
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friya0910(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+5): good 2011-08-29 07:37:41
friya0910(金币+2): 2011-08-29 08:48:13
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friya0910(金币+2): 2011-08-29 08:48:13
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看了半天没有看懂你所说的计算方法,现在我来说一个比较简单的方法吧. 原核表达SDS-PAGE样品制做时,浓缩到A600=20左右可以获得比好的电泳结果,下面以5xloading buffer为例来说一下: 如果你的菌液A600长到了4.0,取发酵液1ml,12000rpm离心2min,弃上清800ul,余下的吹系均匀,取20ul,加5ul 5xloading buffer,沸水浴5分钟,12000rpm离心2min,上清即可做为电泳样品,大孔胶时上样10ul,小孔胶时上样5ul,只要没有其它的问题,保证你会得到一张很好的电泳结果 |
7楼2011-08-29 00:57:39
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梦想天行8楼
2016-10-16 21:32
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friya0910(金币+1): 谢谢参与
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