应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
81/1返回列表
查看: 1906  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？

采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量，10孔小胶：270uL/（样品浓缩系数*OD600），可是我是从OD600为0.638开始诱导的，菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬，样品浓缩系数为5，按这样算下来我的上样量为86微升，弱弱的问一下，10孔小胶的一个胶孔中能上这么多样吗？
还有大家诱导以后是怎么确定上样量的啊？本人新手，也没人知道，只能在这儿求教各位了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-08-27 10:39:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-27 10:39:47:
采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量，10孔小胶：270uL/（样品浓缩系数*OD600），可是我是从OD600为0.638开始诱导的，菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬，样品浓缩系数为5，按 ...

补充一下，按上面的公式算下来，我最小的上样量是诱导5h以后的，为22.64微升。
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-27 10:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶心飞翔

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
friya0910(金币+2): 2011-08-27 12:47:47
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-28 09:47:01
一般小孔上样量不超过20微，如果是22.64，应该差不多，86微太多了
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-08-27 12:21:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 叶心飞翔 at 2011-08-27 12:21:22:
一般小孔上样量不超过20微，如果是22.64，应该差不多，86微太多了

可我就是按照那个公式算的，因为随着培养时间的延长，菌液浓度增大，如果都上一样的量的话，那就不能看出蛋白的表达量的变化趋势了啊!
赞一下 回复此楼
4楼2011-08-27 12:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶心飞翔

银虫 (小有名气)
★
friya0910(金币+1): 2011-08-28 14:41:11
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-28 16:53:48
引用回帖:
4楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-26 16:57:53:
可我就是按照那个公式算的，因为随着培养时间的延长，菌液浓度增大，如果都上一样的量的话，那就不能看出蛋白的表达量的变化趋势了啊!

你在摸索条件吗？你可以缩小相同的倍数，这样也具有可比性。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-08-27 18:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
西瓜: 摸索条件时不必太纠结，做就是啦 2011-08-28 16:55:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by 叶心飞翔 at 2011-08-27 18:32:18:
你在摸索条件吗？你可以缩小相同的倍数，这样也具有可比性。

是的，我也这么打算的，跑跑看吧！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-08-28 14:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+5): good 2011-08-29 07:37:41
friya0910(金币+2): 2011-08-29 08:48:13
看了半天没有看懂你所说的计算方法，现在我来说一个比较简单的方法吧.
原核表达SDS-PAGE样品制做时，浓缩到A600=20左右可以获得比好的电泳结果，下面以5xloading buffer为例来说一下：
如果你的菌液A600长到了4.0，取发酵液1ml，12000rpm离心2min，弃上清800ul，余下的吹系均匀，取20ul，加5ul 5xloading buffer，沸水浴5分钟，12000rpm离心2min，上清即可做为电泳样品，大孔胶时上样10ul，小孔胶时上样5ul，只要没有其它的问题，保证你会得到一张很好的电泳结果
赞一下(3人) 回复此楼
7楼2011-08-29 00:57:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
梦想天行8楼
2016-10-16 21:32   回复  
friya0910(金币+1): 谢谢参与
， 发自小木虫Android客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 friya0910 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭