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friya0910

新虫 (正式写手)

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[交流] 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？

采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量，10孔小胶：270uL/（样品浓缩系数*OD600），可是我是从OD600为0.638开始诱导的，菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬，样品浓缩系数为5，按这样算下来我的上样量为86微升，弱弱的问一下，10孔小胶的一个胶孔中能上这么多样吗？
还有大家诱导以后是怎么确定上样量的啊？本人新手，也没人知道，只能在这儿求教各位了！

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1楼 2011-08-27 10:39:47

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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

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★ ★ ★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+5): good 2011-08-29 07:37:41
friya0910(金币+2): 2011-08-29 08:48:13

看了半天没有看懂你所说的计算方法，现在我来说一个比较简单的方法吧.
原核表达SDS-PAGE样品制做时，浓缩到A600=20左右可以获得比好的电泳结果，下面以5xloading buffer为例来说一下：
如果你的菌液A600长到了4.0，取发酵液1ml，12000rpm离心2min，弃上清800ul，余下的吹系均匀，取20ul，加5ul 5xloading buffer，沸水浴5分钟，12000rpm离心2min，上清即可做为电泳样品，大孔胶时上样10ul，小孔胶时上样5ul，只要没有其它的问题，保证你会得到一张很好的电泳结果

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7楼2011-08-29 00:57:39

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friya0910

新虫 (正式写手)

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引用回帖:

1楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-27 10:39:47:
采用默克表达手册上标准SDS-PAGE凝胶上样量计算方法计算上样量，10孔小胶：270uL/（样品浓缩系数*OD600），可是我是从OD600为0.638开始诱导的，菌液处理是取500微升最后用100微升loading重悬，样品浓缩系数为5，按 ...

补充一下，按上面的公式算下来，我最小的上样量是诱导5h以后的，为22.64微升。

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2楼2011-08-27 10:40:58

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