| 查看: 1744 | 回复: 3 | |||
bulebird金虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】求助酿酒酵母转化 已有3人参与
|
|
我在实验过程中遇到的问题是：转化A+KanMX+B这个片段进入酿酒酵母基因组（A,B片段分别是酿酒酵母X基因外部上下游约500bp的同源区），得到X基因缺失的转化子。重组后一方面将KanMX基因引入酵母染色体，使重组菌株产生G418抗性；另一方面，KanMX片段同源重组替换了酵母染色体上的X基因，从而实现该基因的敲除。 用抗性基因的上下游引物扩增转化子能正确扩增KanMX抗性基因大小的片段，但是在X基因外部和KanMX抗性基因内部设计的一对引物扩增，始终没有扩增出来（应该不是PCR的问题）。我怀疑是转化过程遇到了问题，导致的假阳性。 想请教酿酒酵母电转化的方法，及一些注意事项。 如果哪位虫友知道某个研究所或企业能做这方面的实验，向我介绍一下。合作也可以。 谢谢！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有289人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助一个关于酿酒酵母转化的问题
已经有19人回复
- 酿酒酵母转化建立突变库
已经有13人回复
- 重组酿酒酵母转化子筛选的问题
已经有12人回复
- 求助酿酒酵母菌种选育方面的专家（项目合作）！急
已经有6人回复
- 急求酿酒酵母的电转感受态制备方法和转化方法
已经有13人回复
- 20金币 求助关于酿酒酵母的放大培养
已经有9人回复
- 酵母质粒转化及提取验证问题求助
已经有12人回复
- 【求助/交流】酵母培养
已经有27人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母URA3基因敲除的问题
已经有30人回复
- 【求助/交流】酵母表达和原核表达，在技术上有什么不同？
已经有6人回复
- 【求助/交流】管囊酵母和酿酒酵母
已经有9人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母利用半乳糖的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母表达载体的构建问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母的乙醇最大耐受浓度
已经有7人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母drop-out的配置~~
已经有12人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母真核表达载体构建和连接的问题
已经有6人回复
iaminxanadu
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1473.3
- 散金: 1300
- 红花: 14
- 帖子: 631
- 在线: 429.6小时
- 虫号: 531438
- 注册: 2008-03-23
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
2楼2010-04-16 14:57:41
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4708.8
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2318
- 在线: 742.9小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
3楼2010-04-26 11:26:30
yushan3758
铁虫 (正式写手)
无
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1705
- 散金: 2
- 帖子: 403
- 在线: 122.8小时
- 虫号: 718972
- 注册: 2009-03-10
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
4楼2010-07-11 19:40:49
