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wuguangxia

银虫 (初入文坛)

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[交流] 酿酒酵母转化建立突变库已有4人参与

各位虫友们好！有没有最近做酵母转化的，我想向各位大虾请教一下。
我最近做酵母转化这一块，但是需要很高的转化效率，达到一定的库容才行，也就是说建立一个突变文库，有没有人做过用连接产物直接转化酿酒酵母感受态的？？？

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1楼 2011-09-06 19:18:56

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wuguangxia

银虫 (初入文坛)

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★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 感谢参与 2011-09-27 17:08:16

l)实验开始前两天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5mlYPD培养基中，30℃振荡培养过夜。
2)前一天晚上，取适量(5微升左右)的过夜培养液接种到30m1YPAD培养基，30℃振荡培养过夜，到细胞密度为 1x10，细胞/m1(0D60 =0.3一0.5)。为获得更高的转化效率，可用YPAD稀释培养液至细胞密度为 2x106细胞/m1，培养2~4h。
3)取1.2ml培养液在室温下3000g离心lmin，收集细胞。细胞用lml无菌水重
悬，室温下3000g离心lmin，沉淀细胞。
4)细胞用lml铿盐溶液(1体积10xTE缓冲液，1体积10x乙酸铿贮液，8体
积无菌超纯水，现配现用)重悬。
5)室温下3000g离心lmin，去上清，重新用0.2ml铿盐溶液重悬细胞，感受态
制备完毕。