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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助一个关于酿酒酵母转化的问题
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jzyzqbx

木虫 (小有名气)

[求助] 求助一个关于酿酒酵母转化的问题

最近在做DNA改组，想利用酿酒酵母作为表达载体，因为改组后的DNA需要筛选，需要建库，请问载体与目的基因连接后可以直接转化到酿酒酵母中进行筛选吗？如果可以，载体与目的基因加入连接酶连接过夜后，在转入酵母前需要做怎样的处理。怎样可以提高转化效率，用电转还是化转呢？
谢谢大家
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1楼 2012-02-15 23:22:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by jzyzqbx at 2012-02-16 10:18:32:
酿酒酵母的电转怎么做呀？

载体构建的步骤和大肠杆菌中质粒转化一样的，也是转大肠，等构建成功后提质粒电转化酵母，文献很多的，自己查查看就知道了。
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6楼2012-02-16 13:20:26
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匿名

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16楼2012-02-20 15:35:18
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电转比化转效率高这是肯定的。
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2楼2012-02-16 07:54:08
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般酿酒酵母的表达载体都是穿梭载体，建库那一步为什么不在大肠杆菌里面做呢？肯定更容易操作一些。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-02-16 09:17:49
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jzyzqbx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-02-16 07:54:08:
电转比化转效率高这是肯定的。

酿酒酵母的电转怎么做呀？
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4楼2012-02-16 10:18:32
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jzyzqbx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by susizheng at 2012-02-16 09:17:49:
一般酿酒酵母的表达载体都是穿梭载体，建库那一步为什么不在大肠杆菌里面做呢？肯定更容易操作一些。

先转大肠，再转酵母的话会不会工作量比较大呢？而且基因来源于真核，在大肠中不能表达。看过一篇文献是酵母建库的，不知可行否
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5楼2012-02-16 10:22:48
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杜拉拉314159

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也在做酿酒酵母，用的EBY100，一直在做化学转化，还没有成功呢，最后是要用酵母表面展示，请问楼主是不是也要做这个？
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自己选择的路，跪着也要走完！
7楼2012-02-16 15:54:45
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匿名

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8楼2012-02-16 17:19:28
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匿名

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9楼2012-02-16 17:25:33
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杜拉拉314159

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lmxu0917 at 2012-02-16 17:19:28:
你用的是PYD1载体？

是的，你也是么？
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自己选择的路，跪着也要走完！
10楼2012-02-16 20:23:28
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