应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题
211/3返回列表123下一页
查看: 3497  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

huang1030

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题 已有16人参与

我们实验室做毕赤酵母电转一直没转成，以前转完不是不长，就是长满了整块板，而且后来还长出红的。最近从别人那弄了一支菌，我们实验室用的是GS115，转完后看情形挺正常的，长得不是很多，形态也正确，挑了几个摇菌后PCR，确什么也没P到，是怎么回事呢？还是没转进去吗？我是跟师兄做的，我也不是很懂，望各位大侠多多指教，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-08-05 08:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):good！ 2010-08-05 12:48:00
用的是什么筛选，如果是营养缺陷型筛选，一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR，如果是菌液PCR或菌落PCR，酵母肯定做不了，还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr，我试过，没成功。
赞一下(3人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-08-05 09:55:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

huang1030

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-08-05 09:55:38:
用的是什么筛选，如果是营养缺陷型筛选，一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR，如果是菌液PCR或菌落PCR，酵母肯定做不了，还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr， ...

是用营养缺陷筛选的。PCR是直接菌落煮冻煮后做的。以前转化后用同样方法P出来的还有一条条带呢，只是根据毕赤酵母操作手册上说转化后应该是有两条条带的，这次怎么一条条带也没有了呢。。。
赞一下 回复此楼
3楼2010-08-05 10:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是提一下基因组再pcr吧。
你转化时可以做一个对照，不加质粒的转化，涂板看看菌体是不是有问题。
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-08-05 13:37:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huang1030

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-08-05 13:37:15:
还是提一下基因组再pcr吧。
你转化时可以做一个对照，不加质粒的转化，涂板看看菌体是不是有问题。

好的，谢谢你哦！
回复此楼
5楼2010-08-05 13:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

金虫鸣晓

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的片段是多长？
如果太大，即使转到酵母里，也是P不出来的。
建议PCR的片段不要超过1000bp。
另外，建议用新鲜的菌液做PCR，收集菌体后煮沸10分钟
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-08-05 14:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接筛表达
回复此楼
7楼2010-08-05 14:08:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huang1030

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 金虫鸣晓 at 2010-08-05 14:02:39:
你的片段是多长？
如果太大，即使转到酵母里，也是P不出来的。
建议PCR的片段不要超过1000bp。
另外，建议用新鲜的菌液做PCR，收集菌体后煮沸10分钟

片段2000多bp，菌液是用的新鲜的，是煮沸半个小时，冻十分钟，再煮沸半个小时，然后用无菌水洗了以后再做PCR的。
赞一下 回复此楼
8楼2010-08-05 15:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

金虫鸣晓

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
2000bp太长，你从中间设计一个引物，PCR的片段短点
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-08-07 11:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzp55zzp

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
2000bp有点长了，在中间找段特异片段扩下看看
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-08-09 11:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huang1030 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 东南大学364求调剂 +3 JasonYuiui 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:57 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +3 腻腻gk 2026-03-14 3/150 2026-03-15 17:28 by 小物理化学
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:14 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 考研材料与化工，求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:14 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 285求调剂 +4 ytter 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:48 by jxchenghu
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭