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huang1030

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[交流] 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题已有16人参与

我们实验室做毕赤酵母电转一直没转成，以前转完不是不长，就是长满了整块板，而且后来还长出红的。最近从别人那弄了一支菌，我们实验室用的是GS115，转完后看情形挺正常的，长得不是很多，形态也正确，挑了几个摇菌后PCR，确什么也没P到，是怎么回事呢？还是没转进去吗？我是跟师兄做的，我也不是很懂，望各位大侠多多指教，谢谢！

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1楼 2010-08-05 08:47:09

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susizheng

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):good！ 2010-08-05 12:48:00

用的是什么筛选，如果是营养缺陷型筛选，一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR，如果是菌液PCR或菌落PCR，酵母肯定做不了，还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr，我试过，没成功。

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Thank-you，so-blue.

2楼2010-08-05 09:55:38

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huang1030

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引用回帖:

Originally posted by susizheng at 2010-08-05 09:55:38:
用的是什么筛选，如果是营养缺陷型筛选，一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR，如果是菌液PCR或菌落PCR，酵母肯定做不了，还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr， ...

是用营养缺陷筛选的。PCR是直接菌落煮冻煮后做的。以前转化后用同样方法P出来的还有一条条带呢，只是根据毕赤酵母操作手册上说转化后应该是有两条条带的，这次怎么一条条带也没有了呢。。。

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3楼2010-08-05 10:37:19

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