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huang1030

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题已有16人参与

我们实验室做毕赤酵母电转一直没转成,以前转完不是不长,就是长满了整块板,而且后来还长出红的。最近从别人那弄了一支菌,我们实验室用的是GS115,转完后看情形挺正常的,长得不是很多,形态也正确,挑了几个摇菌后PCR,确什么也没P到,是怎么回事呢?还是没转进去吗?我是跟师兄做的,我也不是很懂,望各位大侠多多指教,谢谢!
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zzp55zzp

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
2000bp有点长了,在中间找段特异片段扩下看看
10楼2010-08-09 11:01:57
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3):good! 2010-08-05 12:48:00
用的是什么筛选,如果是营养缺陷型筛选,一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR,如果是菌液PCR或菌落PCR,酵母肯定做不了,还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr,我试过,没成功。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-08-05 09:55:38
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huang1030

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-08-05 09:55:38:
用的是什么筛选,如果是营养缺陷型筛选,一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR,如果是菌液PCR或菌落PCR,酵母肯定做不了,还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr, ...

是用营养缺陷筛选的。PCR是直接菌落煮冻煮后做的。以前转化后用同样方法P出来的还有一条条带呢,只是根据毕赤酵母操作手册上说转化后应该是有两条条带的,这次怎么一条条带也没有了呢。。。
3楼2010-08-05 10:37:19
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还是提一下基因组再pcr吧。
你转化时可以做一个对照,不加质粒的转化,涂板看看菌体是不是有问题。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-08-05 13:37:15
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