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huang1030

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题 已有16人参与

我们实验室做毕赤酵母电转一直没转成,以前转完不是不长,就是长满了整块板,而且后来还长出红的。最近从别人那弄了一支菌,我们实验室用的是GS115,转完后看情形挺正常的,长得不是很多,形态也正确,挑了几个摇菌后PCR,确什么也没P到,是怎么回事呢?还是没转进去吗?我是跟师兄做的,我也不是很懂,望各位大侠多多指教,谢谢!
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金虫鸣晓

铜虫 (小有名气)


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你的片段是多长?
如果太大,即使转到酵母里,也是P不出来的。
建议PCR的片段不要超过1000bp。
另外,建议用新鲜的菌液做PCR,收集菌体后煮沸10分钟
6楼2010-08-05 14:02:39
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金虫鸣晓

铜虫 (小有名气)


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2000bp太长,你从中间设计一个引物,PCR的片段短点
9楼2010-08-07 11:05:56
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