应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题
51/1返回列表
查看: 3517  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

huang1030

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题 已有16人参与

我们实验室做毕赤酵母电转一直没转成，以前转完不是不长，就是长满了整块板，而且后来还长出红的。最近从别人那弄了一支菌，我们实验室用的是GS115，转完后看情形挺正常的，长得不是很多，形态也正确，挑了几个摇菌后PCR，确什么也没P到，是怎么回事呢？还是没转进去吗？我是跟师兄做的，我也不是很懂，望各位大侠多多指教，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-08-05 08:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huang1030

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 金虫鸣晓 at 2010-08-05 14:02:39:
你的片段是多长？
如果太大，即使转到酵母里，也是P不出来的。
建议PCR的片段不要超过1000bp。
另外，建议用新鲜的菌液做PCR，收集菌体后煮沸10分钟

片段2000多bp，菌液是用的新鲜的，是煮沸半个小时，冻十分钟，再煮沸半个小时，然后用无菌水洗了以后再做PCR的。
赞一下 回复此楼
8楼2010-08-05 15:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):good！ 2010-08-05 12:48:00
用的是什么筛选，如果是营养缺陷型筛选，一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR，如果是菌液PCR或菌落PCR，酵母肯定做不了，还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr，我试过，没成功。
赞一下(3人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-08-05 09:55:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huang1030

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-08-05 09:55:38:
用的是什么筛选，如果是营养缺陷型筛选，一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR，如果是菌液PCR或菌落PCR，酵母肯定做不了，还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr， ...

是用营养缺陷筛选的。PCR是直接菌落煮冻煮后做的。以前转化后用同样方法P出来的还有一条条带呢，只是根据毕赤酵母操作手册上说转化后应该是有两条条带的，这次怎么一条条带也没有了呢。。。
赞一下 回复此楼
3楼2010-08-05 10:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是提一下基因组再pcr吧。
你转化时可以做一个对照，不加质粒的转化，涂板看看菌体是不是有问题。
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-08-05 13:37:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 299求调剂 +4 △小透明* 2026-03-17 4/200 2026-03-17 20:09 by peike
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭