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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题
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无名小虫

银虫 (正式写手)
★
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直接pcr肯定没有结果，得提取酵母基因组，可以试试裂解酶法，效果不错
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11楼2010-08-09 18:18:53
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银杏下

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
相比酿酒酵母，毕赤酵母菌落PCR确实很有难度，抽基因组比较现实
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12楼2010-08-09 19:30:10
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兔兔yy070330

铜虫 (初入文坛)
★
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我开始也一直用菌落PCR都没有成功过，后来提基因组，P出来是正确的了
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13楼2011-09-05 22:11:38
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liu208xj

金虫 (正式写手)
★
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1122656楼: Originally posted by 金虫鸣晓 at 2010-08-07 11:05:56
2000bp太长，你从中间设计一个引物，PCR的片段短点

2000+是可以P出来的，我做的目的基因基本上是这么长
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14楼2012-08-03 14:34:13
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kk8993011

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
挑单菌落扩培，提基因组DNA，用通用引物AOX，如果有2条带，恭喜你做成功了
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15楼2012-09-24 15:29:16
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
★
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6楼: Originally posted by 金虫鸣晓 at 2010-08-05 14:02:39
你的片段是多长？
如果太大，即使转到酵母里，也是P不出来的。
建议PCR的片段不要超过1000bp。
另外，建议用新鲜的菌液做PCR，收集菌体后煮沸10分钟

为什么100bp以上的扩增不出来啊？有什么理论依据或者是经验吗？
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16楼2013-11-20 15:16:47
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qiuqiushine

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2010-08-05 09:55:38
用的是什么筛选，如果是营养缺陷型筛选，一般长出来的都是阳性的。抗生素筛选的话就不大好说。
另外摇菌后PCR，如果是菌液PCR或菌落PCR，酵母肯定做不了，还是提下基因组吧。
也有人说菌液冷冻后煮沸做菌液pcr，我 ...

你好，我做的是9k载体转入GS115，MD平板上的菌落直接挑取放入PCR体系中做PCR，没有目的条带。如果说每隔单菌落都要提取基因组，拿工作量是相当大，请问你是怎么提取基因组的呢，谢谢
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17楼2013-12-16 19:51:29
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乐云蓝

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by qiuqiushine at 2013-12-16 19:51:29
你好，我做的是9k载体转入GS115，MD平板上的菌落直接挑取放入PCR体系中做PCR，没有目的条带。如果说每隔单菌落都要提取基因组，拿工作量是相当大，请问你是怎么提取基因组的呢，谢谢...

你好  我面临跟你相同的问题，请问有解决吗？如果解决了，能否发我一份  谢谢
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能变的只能是自己
18楼2014-09-17 10:15:28
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笨笨和傻猪

银虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 金虫鸣晓 at 2010-08-05 14:02:39
你的片段是多长？
如果太大，即使转到酵母里，也是P不出来的。
建议PCR的片段不要超过1000bp。
另外，建议用新鲜的菌液做PCR，收集菌体后煮沸10分钟

为什么片段太大，pcr无条带？谢谢
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19楼2014-11-14 08:49:20
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笨笨和傻猪

银虫 (小有名气)
您好，你是怎么做的？我的也没有条带
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20楼2014-11-14 08:51:10
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