应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】分离酵母质粒
131/1返回列表
查看: 1829  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xuanmu0929

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】分离酵母质粒

我从酵母中提取两种质粒，用试剂盒提的，PCR鉴定两种质粒均提出来了，它们具有不同抗性，因为想测序，所以把质粒转入大肠杆菌，寻找只有一种抗性的菌株然后去测序，可是一直转不进去，不知有没有更好的方法

[ Last edited by xuanmu0929 on 2011-1-10 at 08:50 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-01-10 08:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real339

金虫 (正式写手)
xuanmu0929(金币+1): 2011-01-10 10:50:50
转入大肠杆菌？是能在大肠杆菌复制的质粒吗？
赞一下 回复此楼
2楼2011-01-10 09:55:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx1984

木虫 (正式写手)
xuanmu0929(金币+1): 2011-01-10 10:50:42
质粒的量是多少?是不是太多了
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-10 10:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuanmu0929

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by real339 at 2011-01-10 09:55:23:
转入大肠杆菌？是能在大肠杆菌复制的质粒吗？

是的，转超级菌，培养好几天，只长出很小的菌落，挑单克隆置于相应抗性的培养基中却不生长，不知有其他的分离法方法吗？谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-10 10:50:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuanmu0929

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zx1984 at 2011-01-10 10:08:08:
质粒的量是多少?是不是太多了

不多呀，浓度才50呀，挺低的
赞一下 回复此楼
5楼2011-01-10 10:52:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-10 12:05:53
xuanmu0929(金币+1): 2011-01-10 13:40:34
同意二楼的观点，质粒用的是穿梭载体吗？如果是应该没有问题的！
另你要送测序，只要量足够，给点引物直接送就行了呀，为什么还要转进E.coli呢？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-01-10 11:16:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real339

金虫 (正式写手)
★ ★
silicare(金币+2):这种可能性最大 2011-01-10 11:41:03
xuanmu0929(金币+1): 2011-01-11 08:56:51
培养好多天才长出一点，应该不是你要的菌，这可能是杂菌。大肠杆菌长的很快的。十几个小时就够了。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-01-10 11:18:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real339

金虫 (正式写手)
★ ★
silicare(金币+2):分析的很透彻 2011-01-10 11:41:24
xuanmu0929(金币+1): 2011-01-11 08:56:58
还有就是你的质粒的抗性基因是不是有原核的启动子啊？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-01-10 11:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real339

金虫 (正式写手)
建议通过梯度的抗生素浓度选择合适的筛选压。然后再分析是不是载体的原因，看能不能在原核细胞内表达吧。
赞一下 回复此楼
9楼2011-01-10 11:21:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuanmu0929

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by srlee at 2011-01-10 11:16:52:
同意二楼的观点，质粒用的是穿梭载体吗？如果是应该没有问题的！
另你要送测序，只要量足够，给点引物直接送就行了呀，为什么还要转进E.coli呢？

是穿梭质粒，质粒浓度太低了，只有50ng/ul，估计测序测不出来
赞一下 回复此楼
10楼2011-01-10 13:40:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xuanmu0929 at 2011-01-10 13:40:05:

是穿梭质粒，质粒浓度太低了，只有50ng/ul，估计测序测不出来

50ng/ul，不低了，符合测序要求。
赞一下 回复此楼
11楼2011-01-10 15:32:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuanmu0929

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-01-10 15:32:31:

50ng/ul，不低了，符合测序要求。

呵呵，谢谢你！非常感谢
赞一下 回复此楼
12楼2011-01-10 16:08:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
147359楼: Originally posted by xuanmu0929 at 2011-01-10 16:08:59:
呵呵，谢谢你！非常感谢

你好，我在做提取质粒，我的是单拷贝质粒，而且比较大，有十几KB，请问你用的是什么试剂盒呀？你的有多大？谢谢
赞一下 回复此楼
13楼2012-05-15 00:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xuanmu0929 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭