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xuanmu0929

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】分离酵母质粒

我从酵母中提取两种质粒,用试剂盒提的,PCR鉴定两种质粒均提出来了,它们具有不同抗性,因为想测序,所以把质粒转入大肠杆菌,寻找只有一种抗性的菌株然后去测序,可是一直转不进去,不知有没有更好的方法

[ Last edited by xuanmu0929 on 2011-1-10 at 08:50 ]
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real339

金虫 (正式写手)


建议通过梯度的抗生素浓度选择合适的筛选压。然后再分析是不是载体的原因,看能不能在原核细胞内表达吧。
9楼2011-01-10 11:21:49
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real339

金虫 (正式写手)


xuanmu0929(金币+1): 2011-01-10 10:50:50
转入大肠杆菌?是能在大肠杆菌复制的质粒吗?
2楼2011-01-10 09:55:23
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zx1984

木虫 (正式写手)


xuanmu0929(金币+1): 2011-01-10 10:50:42
质粒的量是多少?是不是太多了
3楼2011-01-10 10:08:08
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xuanmu0929

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by real339 at 2011-01-10 09:55:23:
转入大肠杆菌?是能在大肠杆菌复制的质粒吗?

是的,转超级菌,培养好几天,只长出很小的菌落,挑单克隆置于相应抗性的培养基中却不生长,不知有其他的分离法方法吗?谢谢
4楼2011-01-10 10:50:11
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