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chenyuqin

新虫 (小有名气)

★
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呵呵,先转化大肠杆菌,然后提质粒,如果你的载体都酶切验证对的话就可以转化农杆菌了。转化了农杆菌不容易提质粒,菌落PCR验证就OK了。
where there is a will,there ia a way.
2楼2011-01-06 14:04:17
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军

★
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其实只要摇3ml菌就行,很建议电击转化,每一次转化1ul-5ul,农杆菌感受态制备也很简单。农杆菌的质粒拷贝数很低,建议PCR验证扩增40个Cycle。
3楼2011-01-06 14:24:47
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yabxxh

木虫 (正式写手)

★
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摇的菌够你提质粒行了,我一般摇15ml,当然是可以用质粒小提的。另农杆菌质粒容易丢失,最好多做几个stock,复苏的时候也不要划版,直接用灭菌枪头吸取菌液,或挑取冰渣,好运
4楼2011-01-06 16:18:01
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070250035

银虫 (小有名气)

★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by chenyuqin at 2011-01-06 14:04:17
呵呵,先转化大肠杆菌,然后提质粒,如果你的载体都酶切验证对的话就可以转化农杆菌了。转化了农杆菌不容易提质粒,菌落PCR验证就OK了。

菌P不是假阳性很高吗?
探究知识的海洋
5楼2013-05-22 14:37:24
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chenyuqin

新虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 070250035 at 2013-05-22 14:37:24
菌P不是假阳性很高吗?...

农杆菌的还好吧,假阳性率比较低,否则你可以测序的~~
where there is a will,there ia a way.
6楼2013-05-23 12:33:46
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