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【求助/交流】农杆菌转化
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1楼
2011-01-06 11:12:14
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翱宇
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小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
其实只要摇3ml菌就行,很建议电击转化,每一次转化1ul-5ul,农杆菌感受态制备也很简单。农杆菌的质粒拷贝数很低,建议PCR验证扩增40个Cycle。
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3楼
2011-01-06 14:24:47
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chenyuqin
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小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
呵呵,先转化大肠杆菌,然后提质粒,如果你的载体都酶切验证对的话就可以转化农杆菌了。转化了农杆菌不容易提质粒,菌落PCR验证就OK了。
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2楼
2011-01-06 14:04:17
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小木虫(金币
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摇的菌够你提质粒行了,我一般摇15ml,当然是可以用质粒小提的。另农杆菌质粒容易丢失,最好多做几个stock,复苏的时候也不要划版,直接用灭菌枪头吸取菌液,或挑取冰渣,好运
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4楼
2011-01-06 16:18:01
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2楼
:
Originally posted by
chenyuqin
at 2011-01-06 14:04:17
呵呵,先转化大肠杆菌,然后提质粒,如果你的载体都酶切验证对的话就可以转化农杆菌了。转化了农杆菌不容易提质粒,菌落PCR验证就OK了。
菌P不是假阳性很高吗?
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探究知识的海洋
5楼
2013-05-22 14:37:24
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