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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 做农杆菌转化的请进
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XLJ海阔天空

金虫 (小有名气)

[交流] 做农杆菌转化的请进

各位大侠好，关于抗生素浓度的筛选请教一下：

农杆菌侵染后，经过共培养一段时间后，需要将外植体转移到抑菌培养基上来抑制多余农杆菌的生长，需要对所加抗生素的浓度进行筛选。不知道各位大侠都是用的什么方法来筛选的？
看文献有的是用测OD值的方式来看不同浓度的抗生素的抑菌效果？你是用这种方法吗？这样可行吗？你具体是怎么操作的啊？
还有一种是外植体侵染共培养后，转到含不同浓度抗生素的培养基上来看其抑菌效果，自己感觉好像这个比前一个靠谱。
你使用的什么方法啊？希望和你交流一下，谢谢！
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1楼 2012-04-07 16:22:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bbzj

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by XLJ海阔天空 at 2012-04-09 16:29:37:
那你在真正去做转化的时候也是这样让无菌风将其表面菌液吹干后就转到抑菌的培养i基上，不用无菌水什么的清洗外植体吗？不知道你转化的情况怎么样？

不好意思,忘记了,还是有用无菌水洗四次然后才吹干的.我当时做的是甘蔗.最后还是得到几个转化子的.
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9楼2012-04-09 16:56:17
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leannele

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
XLJ海阔天空(金币+1): 谢谢参与
jhu132llh: 金币+2, 鼓励积极交流 2012-04-11 21:14:47
我们都是转筛选前吹干，在筛选培养基里边加入头孢和目的基因的抗生素。具体的浓度是要筛选的，不同的植物的不同的材料也不一样。我们的实生态和成年态就很大的差别。也可以看看别人发表的文章。
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10楼2012-04-11 11:14:43
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普通回帖

neu234

木虫之王 (文学泰斗)
★
XLJ海阔天空(金币+1): 谢谢参与
这个不清楚
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2楼2012-04-07 20:00:39
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曾经遥远

银虫 (正式写手)
★
XLJ海阔天空(金币+1): 谢谢参与
我也想知道
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3楼2012-04-08 00:17:16
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wiln1

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
XLJ海阔天空(金币+1): 谢谢参与
jhu132llh: 金币+2, 鼓励积极交流 2012-04-09 18:11:30
我觉得关键还是：共培养后的外植体清洗，多洗几次，要把农杆菌洗得尽可能干净。我以前第一次做的时候就是没洗干净不管加多少抗生素都不行，只是时间问题，浓度大了可能农杆菌就繁殖得慢点。第二次时我就多洗了几次，结果抗生素浓度低点也不长菌。
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4楼2012-04-08 07:29:24
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niushuaiji

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
XLJ海阔天空(金币+1): 谢谢参与
jhu132llh: 金币+3, 感谢新虫积极应助 2012-04-09 18:11:38
培养基中加入头孢霉素可抑制农杆菌的生长，之后再用加有头孢的无菌水冲洗，术语称之为脱毒！
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5楼2012-04-08 14:05:39
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XLJ海阔天空

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wiln1 at 2012-04-08 07:29:24:
我觉得关键还是：共培养后的外植体清洗，多洗几次，要把农杆菌洗得尽可能干净。我以前第一次做的时候就是没洗干净不管加多少抗生素都不行，只是时间问题，浓度大了可能农杆菌就繁殖得慢点。第二次时我就多洗了几次 ...

谢谢，感谢你的真诚交流。确实是这样的，洗的比较好的话，100mg/l 生长20d左右也不会污染
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6楼2012-04-08 16:48:38
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bbzj

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
XLJ海阔天空(金币+1): 谢谢参与
jhu132llh: 金币+2, 感谢新虫积极应助 2012-04-09 18:11:45
记得我当时是用农杆菌侵染后,在超净工作台上吹干,然后接种到含不同浓度梯度的培养基中进行筛选的.
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7楼2012-04-09 10:57:13
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XLJ海阔天空

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bbzj at 2012-04-09 10:57:13:
记得我当时是用农杆菌侵染后,在超净工作台上吹干,然后接种到含不同浓度梯度的培养基中进行筛选的.

那你在真正去做转化的时候也是这样让无菌风将其表面菌液吹干后就转到抑菌的培养i基上，不用无菌水什么的清洗外植体吗？不知道你转化的情况怎么样？
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8楼2012-04-09 16:29:37
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baoak06

银虫 (小有名气)
★
XLJ海阔天空(金币+1): 谢谢参与
设置不同浓度抗生素处理农杆菌菌液，然后测定农杆菌的OD600值
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11楼2012-04-13 13:26:38
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renjieacat

新虫 (初入文坛)
★
XLJ海阔天空(金币+1): 谢谢参与
你好，我现在刚开始做农杆菌转化，也遇到了您之前遇到的问题，需要求助，如果再做不出来就无法毕业了
1 IM最终的PH是多少，
2 共培养之前的OD是0.4么？
3 筛选培养基覆盖后，两天就长满细菌，该如何处理，
真心谢谢了
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12楼2013-12-10 19:13:56
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