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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 农杆菌转化不成功的原因
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 农杆菌转化不成功的原因 已有1人参与

我提取的质粒中电泳时下方出现了很浅的一条带，应该是RNA没有完全消除，这样的质粒直接转化了农杆菌，但是一直没有转化成功，那些RNA会对转化造成影响吗？
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1楼 2014-11-05 10:34:19
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-07 11:39:11
你用什么方法转化？问题可能不是出在质粒上

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2楼2014-11-05 16:24:58
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-05 16:24:58
你用什么方法转化？问题可能不是出在质粒上

我用的冻融法转化的，重组的TRV2质粒转不进去，但是空载的TRV2可以转进去，我重新提取重组TRV2质粒再转化到大肠里还是能够转进去的，会不会是在我双酶切连接TRV2质粒和目的基因时把质粒上的某个元件切掉了所以转不到农杆菌里了？如果是质粒被切坏了，那双酶切后电泳可以看出来吗？
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3楼2014-11-05 16:45:15
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
蓝色泡沫321: 金币+5, ★有帮助, 恩，好的，我也用电转化试试，能不能把电转化感受态细胞制备方法和转化方法发给我呢 2014-11-10 09:39:22
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝色泡沫321 at 2014-11-05 16:45:15
我用的冻融法转化的，重组的TRV2质粒转不进去，但是空载的TRV2可以转进去，我重新提取重组TRV2质粒再转化到大肠里还是能够转进去的，会不会是在我双酶切连接TRV2质粒和目的基因时把质粒上的某个元件切掉了所以转不 ...

这个情况的话，你需要确定载体是否OK，我这边做的是电转化，一直都没不OK的

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4楼2014-11-07 11:47:43
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