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曾经遥远银虫 (正式写手)
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[求助]
农杆菌培养问题
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最近在做农杆菌培养，然后要做菌液pcr，这个菌是学长构建好了载体才给偶的。可是现在它有杂菌了，所以偶又重新画平板纯化。可是可是，偶真真的是菜鸟一个，遇到了两个问题，还请各位大侠支招， 问题一：我加的抗生素有利福平，可是不知道该怎么配利福平母液好？ 问题二：农杆菌划平板后的培养温度是多少？是不是不能超过28°c？偶昨晚划的平板就直接放在37°c培养了，是不是都死了？   |
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嗯....................... 1. 第一个问题我忘了怎么配了 你最好问问配过的师兄师姐 好像Rif很麻烦 如果嫌麻烦 而且你用的是GV3101株系 直接用Gen+你质粒上的抗性来筛就足够了 重点是回答你第二个问题 这个是个很重要的问题 2. 37度农杆菌当然不会死 还活的的好好的 但是高温培养会丢失Ti质粒 似乎3~6个小时培养就会全部丢失 所以农杆菌一般是低温培养保证有选择压力使Ti质粒保存下来 若你Ti质粒都丢失了 你怎么转都不成功的 个人看法 若有说错请高手指正 |
2楼2012-09-17 21:34:13
atlanticwi
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呵呵 谢谢你的耐心解答哈 。偶那农杆菌明确是用利福平和卡那霉素的 所以。。。 6楼2012-09-18 00:23:48
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