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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 农杆菌培养问题
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曾经遥远

银虫 (正式写手)

[求助] 农杆菌培养问题

最近在做农杆菌培养，然后要做菌液pcr，这个菌是学长构建好了载体才给偶的。可是现在它有杂菌了，所以偶又重新画平板纯化。可是可是，偶真真的是菜鸟一个，遇到了两个问题，还请各位大侠支招，
  问题一：我加的抗生素有利福平，可是不知道该怎么配利福平母液好？
  问题二：农杆菌划平板后的培养温度是多少？是不是不能超过28°c？偶昨晚划的平板就直接放在37°c培养了，是不是都死了？
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选择了就不要放弃
1楼 2012-09-17 21:21:05
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曾经遥远

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by starseacow at 2012-09-17 23:21:51
关于利福平配置，我是用DMSO配成50 mg/ml储配液，分装在2 ml EP管内，-20度保存，使用时按每升加1 ml使用。农杆菌一般培养温度在28-30度之间，我以前也搞错过，液体培养37度摇了一夜，结果农杆菌根本不生长。

哎呀   这样的呀   怪不得，偶昨晚划的平板都不长菌的
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选择了就不要放弃
7楼2012-09-18 00:25:34
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
曾经遥远: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-09-17 21:50:08
嗯.......................
      1. 第一个问题我忘了怎么配了 你最好问问配过的师兄师姐 好像Rif很麻烦 如果嫌麻烦 而且你用的是GV3101株系 直接用Gen+你质粒上的抗性来筛就足够了
       重点是回答你第二个问题 这个是个很重要的问题
       2. 37度农杆菌当然不会死 还活的的好好的 但是高温培养会丢失Ti质粒 似乎3~6个小时培养就会全部丢失 所以农杆菌一般是低温培养保证有选择压力使Ti质粒保存下来 若你Ti质粒都丢失了 你怎么转都不成功的
       个人看法 若有说错请高手指正
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Let God do with it as He wills
2楼2012-09-17 21:34:13
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曾经遥远

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-17 21:34:13
嗯.......................
      1. 第一个问题我忘了怎么配了 你最好问问配过的师兄师姐 好像Rif很麻烦 如果嫌麻烦 而且你用的是GV3101株系 直接用Gen+你质粒上的抗性来筛就足够了
       重点是回答你第二个问 ...

你怎么知道是GV3101株系 ？我不是很懂呢。Gen是什么？
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选择了就不要放弃
3楼2012-09-17 21:49:53
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
嗯..............
       大姐啊 你做植物的 农杆菌株系就那么几种 看你还用Rif 估计就是GV3101了
       Gen是Gentamicin（庆大霉素）的简写  非常好配 而且是少数可以高压灭菌的抗生素之一
       老话 嫌麻烦就只用双抗性 Gen+你表达载体抗性 但用Rif+Gen+载体抗性更保险些
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Let God do with it as He wills
4楼2012-09-17 22:20:36
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