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mmzhang

新虫 (小有名气)

[交流] 关于农杆菌侵染洋葱表皮

请问哪位大侠有做过农杆菌侵染洋葱表皮来做基因的亚细胞的定位的？
我尝试了一次，但是失败了，现请教有做过的大侠几个问题：
1、乙酰丁香酮的浓度多少合适？
2、侵染后共培养时是否也需要加乙酰丁香酮？
3、共培养时要加光照吗？
希望做过的大侠给点建议，谢谢了！！！！
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1楼 2011-07-22 19:44:33
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
mmzhang(金币+5):谢谢参与
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-23 17:34:30
mmzhang(金币+1): 4 2011-07-24 10:36:44
这个我也试过，不成功～～～
感觉预培养条件比较重要，但是没有文献支持，都是一堆硕士论文～～～
如果你成功了，顺便告诉我方法吧
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2楼2011-07-23 11:45:53
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十比

木虫 (著名写手)
★
mmzhang(金币+5):谢谢参与
mmzhang(金币+1): 4 2011-07-24 10:36:55
做应该能做出来，只是表达可能很弱
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3楼2011-07-23 17:29:21
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十比

木虫 (著名写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-23 18:28:38
mmzhang(金币+1): 4 2011-07-24 10:37:00
刘海燕, 冯冬茹, 刘兵, 何炎明, 王宏斌 and 王金发 (2009) 农杆菌介导的MpASR蛋白在洋葱表皮细胞的定位研究. 热带亚热带植物学报.   你按照这篇文章试试，希望对你有用。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-23 17:42:53
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changes

木虫 (正式写手)
★
mmzhang(金币+5):谢谢参与
mmzhang(金币+1): 2011-07-24 10:34:35
引用回帖:
Originally posted by mmzhang at 2011-07-22 19:44:33:
请问哪位大侠有做过农杆菌侵染洋葱表皮来做基因的亚细胞的定位的？
我尝试了一次，但是失败了，现请教有做过的大侠几个问题：
1、乙酰丁香酮的浓度多少合适？
2、侵染后共培养时是否也需要加乙酰丁香酮？
3、 ...

问一下，是使用GFP标记目的蛋白吗？
建议使用烟草下表皮或拟南芥下表皮，洋葱表皮的细胞非常简单，除了细胞核、液泡、膜和壁外，没有其他明显的亚细胞器，因此万一你的蛋白定位在叶绿体、内质网、线粒体等细胞器时，无法明确位置啊。
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5楼2011-07-23 19:43:23
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mmzhang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by changes at 2011-07-23 19:43:23:
问一下，是使用GFP标记目的蛋白吗？
建议使用烟草下表皮或拟南芥下表皮，洋葱表皮的细胞非常简单，除了细胞核、液泡、膜和壁外，没有其他明显的亚细胞器，因此万一你的蛋白定位在叶绿体、内质网、线粒体等细胞 ...

是用GFP标记的，我的基因不是在细胞器上的，应该在液泡膜或细胞质膜上，如果用烟草或拟南芥的表皮的话就没办法区分。
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6楼2011-07-24 10:40:25
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mmzhang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 十比 at 2011-07-23 17:42:53:
刘海燕, 冯冬茹, 刘兵, 何炎明, 王宏斌 and 王金发 (2009) 农杆菌介导的MpASR蛋白在洋葱表皮细胞的定位研究. 热带亚热带植物学报.   你按照这篇文章试试，希望对你有用。

我就是参考这篇文献在做的，但是发现里面的乙酰丁香酮的浓度是100 mM，但有其它文献写的是100 uM，所以不能确定是哪个浓度。
你有试过吗，能不能给点建议？
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7楼2011-07-24 10:42:33
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★
mmzhang(金币+5):谢谢参与
看过周围好几个人做过，没一个人做出来的。就算能看到一点荧光本底也非常强，根本达不到发文章的要求。
所以，还是打基因枪吧，真的是低本底高特异性。
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8楼2011-07-26 23:30:37
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sgx7049楼
2011-07-27 09:01   回复  
mmzhang(金币+5):谢谢参与
fruitbbs10楼
2012-05-22 14:24   回复  
mmzhang(金币+1): 谢谢参与
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