24小时热门版块排行榜    

查看: 3337  |  回复: 9

mmzhang

新虫 (小有名气)


[交流] 关于农杆菌侵染洋葱表皮

请问哪位大侠有做过农杆菌侵染洋葱表皮来做基因的亚细胞的定位的?
我尝试了一次,但是失败了,现请教有做过的大侠几个问题:
1、乙酰丁香酮的浓度多少合适?
2、侵染后共培养时是否也需要加乙酰丁香酮?
3、共培养时要加光照吗?
希望做过的大侠给点建议,谢谢了!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
mmzhang(金币+5):谢谢参与
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-23 17:34:30
mmzhang(金币+1): 4 2011-07-24 10:36:44
这个我也试过,不成功~~~
感觉预培养条件比较重要,但是没有文献支持,都是一堆硕士论文~~~
如果你成功了,顺便告诉我方法吧
2楼2011-07-23 11:45:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)



mmzhang(金币+5):谢谢参与
mmzhang(金币+1): 4 2011-07-24 10:36:55
做应该能做出来,只是表达可能很弱
3楼2011-07-23 17:29:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)


★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-23 18:28:38
mmzhang(金币+1): 4 2011-07-24 10:37:00
刘海燕, 冯冬茹, 刘兵, 何炎明, 王宏斌 and 王金发 (2009) 农杆菌介导的MpASR蛋白在洋葱表皮细胞的定位研究. 热带亚热带植物学报.   你按照这篇文章试试,希望对你有用。
4楼2011-07-23 17:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)



mmzhang(金币+5):谢谢参与
mmzhang(金币+1): 2011-07-24 10:34:35
引用回帖:
Originally posted by mmzhang at 2011-07-22 19:44:33:
请问哪位大侠有做过农杆菌侵染洋葱表皮来做基因的亚细胞的定位的?
我尝试了一次,但是失败了,现请教有做过的大侠几个问题:
1、乙酰丁香酮的浓度多少合适?
2、侵染后共培养时是否也需要加乙酰丁香酮?
3、 ...

问一下,是使用GFP标记目的蛋白吗?
建议使用烟草下表皮或拟南芥下表皮,洋葱表皮的细胞非常简单,除了细胞核、液泡、膜和壁外,没有其他明显的亚细胞器,因此万一你的蛋白定位在叶绿体、内质网、线粒体等细胞器时,无法明确位置啊。
5楼2011-07-23 19:43:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mmzhang

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by changes at 2011-07-23 19:43:23:
问一下,是使用GFP标记目的蛋白吗?
建议使用烟草下表皮或拟南芥下表皮,洋葱表皮的细胞非常简单,除了细胞核、液泡、膜和壁外,没有其他明显的亚细胞器,因此万一你的蛋白定位在叶绿体、内质网、线粒体等细胞 ...

是用GFP标记的,我的基因不是在细胞器上的,应该在液泡膜或细胞质膜上,如果用烟草或拟南芥的表皮的话就没办法区分。
6楼2011-07-24 10:40:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mmzhang

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 十比 at 2011-07-23 17:42:53:
刘海燕, 冯冬茹, 刘兵, 何炎明, 王宏斌 and 王金发 (2009) 农杆菌介导的MpASR蛋白在洋葱表皮细胞的定位研究. 热带亚热带植物学报.   你按照这篇文章试试,希望对你有用。

我就是参考这篇文献在做的,但是发现里面的乙酰丁香酮的浓度是100 mM,但有其它文献写的是100 uM,所以不能确定是哪个浓度。
你有试过吗,能不能给点建议?
7楼2011-07-24 10:42:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)



mmzhang(金币+5):谢谢参与
看过周围好几个人做过,没一个人做出来的。就算能看到一点荧光本底也非常强,根本达不到发文章的要求。
所以,还是打基因枪吧,真的是低本底高特异性。
8楼2011-07-26 23:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
sgx7049楼
2011-07-27 09:01   回复  
mmzhang(金币+5):谢谢参与
fruitbbs10楼
2012-05-22 14:24   回复  
mmzhang(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 mmzhang 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见