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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于洋葱表皮亚细胞定位的问题～～
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shaquila

金虫 (正式写手)

[交流] 关于洋葱表皮亚细胞定位的问题～～ 已有7人参与

构建好了GFP fusion载体，本来是要用基因枪的，后面发现做不了
问问能不能用农杆菌介导的方法做，我自己试试一下，方法如下，但是貌似没有侵染进去，请问需要怎么改进？

2.8盘1洋葱表皮预培养
用镊子撕取洋葱里表皮 1cm2小块放在MS培养基上，28℃预培养5h。
2.83)侵染液制备
将菌液加入含抗生素的LB培养基，培养过夜，5000离心5分钟，收集菌体，LB重悬浮，分光光度计测定菌液浓度，其浓度调至OD＝1左右。
2.83)浸染
将上述菌液倒入到预培养培养基中，泡 30min，期间摇动数次。倒去菌液，将洋葱表皮置于灭菌滤纸上吸干表面菌液。
接入共培养培养基（MS培养基加AS），28℃暗培养2天观察。
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1楼 2011-06-13 15:01:09
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西瓜
2楼2011-06-13 23:01:04
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wangqizhao

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可以用原生质体的
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3楼2011-06-13 23:43:59
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shaquila

金虫 (正式写手)
下周准备做，因为要买一堆药品，还没到，所以想先试试，哈
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4楼2011-06-14 10:02:34
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underdog007

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
培养洋葱表皮的MS培养基什么都不加吗？
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5楼2012-12-20 16:21:27
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沙漠落日

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:38:32
Transgenic  tobacco   plants   over  expressing  cold  regulated   protein  CbCOR15b
from  Capsella   bursa-pastoris   exhibit  enhanced   cold  tolerance
这个里面做过洋葱表皮亚细胞定位，看看对你有没有用
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6楼2014-06-19 18:05:07
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:38:39
洋葱表皮瞬时表达实验时用的是洋葱表皮的内表皮，里面只有一个细胞核 和一个大的液胞，基本上没有别的了，据我观察是没有叶绿体的，所以建议不要用洋葱表皮做你这个基因。你可以做别的比如说融合GUS 转化拟南芥烟草之类，进行染色，绿色组织中有，根中没有，不知这样能不能证明定位在叶绿体中，不过比较麻烦一点！
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
7楼2014-06-19 20:20:59
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snhajn

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是农杆菌侵染，每次都观察不到绿色荧光蛋白，不知怎么回事
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8楼2015-02-03 14:36:11
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atmosphere

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by snhajn at 2015-02-03 14:36:11
我也是农杆菌侵染，每次都观察不到绿色荧光蛋白，不知怎么回事

楼主问题解决了吗
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9楼2018-05-16 21:25:15
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