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yhfs1018

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】一只菜鸟关于细胞培养的若干问题，求助老鸟~~

1、这个学期新复苏的U937很多碎片，恳请大家提供一个可行方案，对细胞进行优化选择。急~~~~
2、刚复苏不久的K562抱团现象很明显，已经传至第四代，没有什么改善，怎么办？？？
3、液氮罐里的液氮液面降至一半高度，很多细胞都暴露在液氮外，持续了半个月。这种情况会对细胞有什么影响？？
4、配好的L-Gln溶液在室温下能存放多长时间？？
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1楼 2011-02-23 21:09:02
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-02-24 12:10:15
U937养呗，取少量细胞传代，碎片慢慢减少。
Gln容易分解，室温下放几天就不行了吧。
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2楼2011-02-24 09:13:58
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WAX2010

银虫 (小有名气)
yhfs1018(金币+1): 2011-03-20 15:17:41
细胞不一定要全部浸在液氮里吧，只要罐中液氮不是太少，能够保持里面的低温就好了啊，-80℃冰箱还能保存细胞好久呢。
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3楼2011-02-24 09:40:53
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gorrylee

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
silicare(金币+3): 鼓励新虫参与 2011-02-24 12:10:34
1.2建议用轻轻吹打，小孔板来培养几代，逐步放大培养
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4楼2011-02-24 09:55:59
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
silicare(金币+2): 谢谢分享 2011-02-24 12:10:45
1、2：胰酶消化时间长一些，培养基中和吹打均匀后换成小培养皿养，再换成大一点的
3：细胞肯定死了，我的细胞也有过一样的情况，全死了
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5楼2011-02-24 10:17:22
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_落落_

木虫 (初入文坛)
★ ★ ★
silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-02-24 12:10:58
yhfs1018(金币+2): 2011-03-20 15:16:56
1.复苏细胞有大量碎片，很有可能是融化时间过久，冰晶对细胞造成伤害，造成细胞破裂，加快细胞融化过程，可以用37度水浴箱，或者双手快速揉搓，尽量在1分钟内融解细胞。
2.可能是因为此细胞有抱团生长特性，可上ATCC查询细胞背景特性，如果没有说明此细胞是抱团生长，可能是传代时消化吹打不够，没有把细胞吹打成一两个一起的细胞悬液，导致细胞抱团生长。
3.液氮是创造低温环境，只要液氮罐密闭够好，有1/3的液氮也可能保证罐内低温，细胞不会有影响，但是液氮低于1/3最好及时灌液氮，避免温度升高。
4.Gln易降解，最好现配现用，如果配早了放4度冰箱，过夜的我用过没出现问题，时间长的话最好重新配制。
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6楼2011-02-24 10:17:58
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cheo163

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by _落落_ at 2011-02-24 10:17:58
1.复苏细胞有大量碎片，很有可能是融化时间过久，冰晶对细胞造成伤害，造成细胞破裂，加快细胞融化过程，可以用37度水浴箱，或者双手快速揉搓，尽量在1分钟内融解细胞。
2.可能是因为此细胞有抱团生长特性，可上AT ...

楼上的很详细，同意。Gln在4度冰箱只要不超过一周都没问题，配好后就放-20度冰柜，现用现融
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7楼2014-08-28 16:14:01
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