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fanny9900108

金虫 (小有名气)

[求助] 细胞培养中的问题

Sample Text
请教高手,为什么我养的HEp G2老是生长的很慢,而且死细胞很多,一般传代后的新的培养瓶特别不容易长起来,上面培养液上老是飘着许多死细胞!!!!
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【分子生物】EPI帖 细胞生物学实验经验

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stayhungry,stayfoolish
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回帖置顶 ( 共有2个 )

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good! 2012-03-21 18:59:38
这个细胞还是比较好养的。但细胞刚开始复苏的时候,对细胞密度依赖比较大,长得慢的,你多等待几天,期间换液,慢慢等细胞密度70~80%才传代。
用FBS来养,可以把比例提高到12%,也看看你的培养液的配置时间多长,超过两个星期的可以重新添加谷氨酰胺。
状态不好的细胞,传代时可以离心。
消化时间很关键,如果担心消化过头,可以把胰酶稀释一下。
你的日子如何,你的力量也必如何!
6楼2012-03-21 10:24:36
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 说得很详细了! 2012-03-21 19:00:10
这个细胞我养过给您几个建议:
1、复苏后刚开始几天偶尔会出现长的慢情况(原因不明),但是成长1周左右(细胞密度达90%)传代后恢复状态。
2、确定没有污染后。很可能是细胞恢复期营养跟不足。更换DMEM培养基和hyclone胎牛血清(20%),等恢复生长后更换普通培养基和血清。
3、消化时间把握好,此细胞难消化,当消化时细胞变圆立刻弃去胰酶(含EDTA),然后利用残余胰酶继续消化,当周围变透明时吹打细胞。
4、死细胞会影响活细胞的成长,针对你所叙述情况,传代后4小时建议换液一次,并且最好30小时以上别动培养瓶,经常动培养瓶细胞会长不好的。
7楼2012-03-21 14:43:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

采妮830

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
G2细胞以及L2细胞,总的来说是非常好养的。状态好就算5%的FBS养都会张的。养不好又肯能冻存前就有问题。若是没有污染的话,传代的时候注意要用胰酶充分消化后再吹打下来,这样就避免机械损伤。而且据我的经验,吹得时候气泡多也是造成传代后漂浮细胞多的一个原因,所以尽量避免。希望对你有帮助,以后有问题多多交流~
10楼2012-03-21 20:27:57
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普通回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答问题! 2012-03-20 18:06:24
第一,血清是不是加足了,可以增加血清比例。第二,是不是有污染呢,这就需要楼主仔细对比下正常的细胞和自己养的细胞的形态了。查看细胞之间会不会有黑点、碎片,最后可以怀疑下是不是支原体污染。总能找到原因的
2楼2012-03-20 18:00:16
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zhouli_1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-21 08:05:24
楼主先查一下你这个细胞是不是本身就长的很慢,如果不是可能就是你自己不操纵不认真,导致污染,或者就是你的培养液 PBS有问题,多查查这方面的资料,细胞是用心培养的 这个不能懒 状态不好就要天天换液  祝楼主培养出好细胞!
3楼2012-03-20 19:21:33
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fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-03-20 18:00:16:
第一,血清是不是加足了,可以增加血清比例。第二,是不是有污染呢,这就需要楼主仔细对比下正常的细胞和自己养的细胞的形态了。查看细胞之间会不会有黑点、碎片,最后可以怀疑下是不是支原体污染。总能找到原因的

谢谢~·
stayhungry,stayfoolish
4楼2012-03-21 08:36:23
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fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouli_1991 at 2012-03-20 19:21:33:
楼主先查一下你这个细胞是不是本身就长的很慢,如果不是可能就是你自己不操纵不认真,导致污染,或者就是你的培养液 PBS有问题,多查查这方面的资料,细胞是用心培养的 这个不能懒 状态不好就要天天换液  祝楼主培 ...

谢谢~~
stayhungry,stayfoolish
5楼2012-03-21 08:36:36
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fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2012-03-21 14:43:43:
这个细胞我养过给您几个建议:
1、复苏后刚开始几天偶尔会出现长的慢情况(原因不明),但是成长1周左右(细胞密度达90%)传代后恢复状态。
2、确定没有污染后。很可能是细胞恢复期营养跟不足。更换DMEM培养基和 ...

谢谢,分享你们的经验,非常感谢
stayhungry,stayfoolish
8楼2012-03-21 18:11:36
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fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sxxuan at 2012-03-21 10:24:36:
这个细胞还是比较好养的。但细胞刚开始复苏的时候,对细胞密度依赖比较大,长得慢的,你多等待几天,期间换液,慢慢等细胞密度70~80%才传代。
用FBS来养,可以把比例提高到12%,也看看你的培养液的配置时间多长 ...

恩恩,谢谢你的经验分享
stayhungry,stayfoolish
9楼2012-03-21 18:11:59
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