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sxxuan

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good! 2012-03-21 18:59:38

这个细胞还是比较好养的。但细胞刚开始复苏的时候，对细胞密度依赖比较大，长得慢的，你多等待几天，期间换液，慢慢等细胞密度70～80%才传代。
用FBS来养，可以把比例提高到12%，也看看你的培养液的配置时间多长，超过两个星期的可以重新添加谷氨酰胺。
状态不好的细胞，传代时可以离心。
消化时间很关键，如果担心消化过头，可以把胰酶稀释一下。

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你的日子如何，你的力量也必如何！

6楼2012-03-21 10:24:36

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qingyuansw20

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【答案】应助回帖

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西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 说得很详细了！ 2012-03-21 19:00:10

这个细胞我养过给您几个建议：
1、复苏后刚开始几天偶尔会出现长的慢情况（原因不明），但是成长1周左右（细胞密度达90%）传代后恢复状态。
2、确定没有污染后。很可能是细胞恢复期营养跟不足。更换DMEM培养基和hyclone胎牛血清（20%），等恢复生长后更换普通培养基和血清。
3、消化时间把握好，此细胞难消化，当消化时细胞变圆立刻弃去胰酶（含EDTA），然后利用残余胰酶继续消化，当周围变透明时吹打细胞。
4、死细胞会影响活细胞的成长，针对你所叙述情况，传代后4小时建议换液一次，并且最好30小时以上别动培养瓶，经常动培养瓶细胞会长不好的。

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7楼2012-03-21 14:43:43

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