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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于细胞培养皿容积的问题~!
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bunny0512

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于细胞培养皿容积的问题~! 已有2人参与

最近需要做一批feeder,所以在养MEF.   
本来6cm皿中总体积应为5ml培养基,那我现在用10cm的皿来养MEF,应加入多少体积的培养基呢?
我开始放了10ml培养基,发现液面很薄,怕MEF长不好,所以放了15ml,可这样的话,15cm的皿应该加多少培养基?

有知道的帮解答下,谢啦~!
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在哪里~在哪里见过你~
1楼 2010-10-12 10:50:32
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playboy723

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
bunny0512(金币+1):谢谢~! 2010-10-12 11:11:21
呵呵  不用那么多   我养MEF 10cm dish从来都是加7,8ml的  加多了没必要    你可以第一天加这么多   第二天半量换液  细胞长的很好的  试试吧
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2楼2010-10-12 11:05:06
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playboy723

金虫 (正式写手)
bunny0512(金币+1):谢谢~! 2010-10-12 11:11:37
加15ml的话可以考虑隔天换液  要不浪费培养基和细胞分泌的因子了
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3楼2010-10-12 11:06:08
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bunny0512

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2010-10-12 11:05:06:
呵呵  不用那么多   我养MEF 10cm dish从来都是加7,8ml的  加多了没必要    你可以第一天加这么多   第二天半量换液  细胞长的很好的  试试吧

是要每天都换液?MEF?  不是ES啊..
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在哪里~在哪里见过你~
4楼2010-10-12 11:10:10
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playboy723

金虫 (正式写手)
那你就半量换液吧  效果很好的
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5楼2010-10-12 11:14:56
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bunny0512

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2010-10-12 11:14:56:
那你就半量换液吧  效果很好的

我不怕浪费培养基,就是想知道,应该放多少培养基以保证MEF的生长?然后按这个标准几天换液一次?
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在哪里~在哪里见过你~
6楼2010-10-12 11:17:25
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playboy723

金虫 (正式写手)
bunny0512(金币+3): 2010-10-12 12:06:21
呵呵  这个没有标准   标准是以细胞的生长状态作为标准  如果状态好的话可以每天换液  如果细胞稀少的话就一次加液后3天后再换液   思路不要这样固定
每天换液的话加7,8毫升就可以了
隔天换液加10毫升
半量换液第一天加7毫升，第二天吸掉一办后再加7毫升，第三天完全弃掉旧液体重新加7毫升  明白了没?
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7楼2010-10-12 11:47:41
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bunny0512

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2010-10-12 11:47:41:
呵呵  这个没有标准   标准是以细胞的生长状态作为标准  如果状态好的话可以每天换液  如果细胞稀少的话就一次加液后3天后再换液   思路不要这样固定
每天换液的话加7,8毫升就可以了
隔天换液加10毫升
半量换液 ...

对了 ,再请教您下,您知道MEF P1复苏的时候,离心后吹打不开,像碎片一样的块,这样能张好么?
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在哪里~在哪里见过你~
8楼2010-10-12 12:07:32
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playboy723

金虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-10-12 12:26:38
复苏离心后你干嘛要吹它啊   本来就很娇嫩而且刚复苏  不要那么折磨它   再说团块的话很好贴壁成活的，等它长满后消化传代时用胰酶消化就可以消化成单细胞了，多养养就有经验了   MEF的质量会直接影响到feeder和ES细胞的质量  所以好好养吧
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9楼2010-10-12 12:20:44
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bunny0512

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2010-10-12 12:20:44:
复苏离心后你干嘛要吹它啊   本来就很娇嫩而且刚复苏  不要那么折磨它   再说团块的话很好贴壁成活的，等它长满后消化传代时用胰酶消化就可以消化成单细胞了，多养养就有经验了   MEF的质量会直接影响到feeder和E ...

离心后当然要吹了...要不就一坨...我还要分皿捏...我第一次养...
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在哪里~在哪里见过你~
10楼2010-10-12 12:27:14
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