24小时热门版块排行榜    

查看: 3488  |  回复: 11
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看

fanny9900108

金虫 (小有名气)

[求助] 细胞培养中的问题

Sample Text
请教高手,为什么我养的HEp G2老是生长的很慢,而且死细胞很多,一般传代后的新的培养瓶特别不容易长起来,上面培养液上老是飘着许多死细胞!!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 细胞生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

stayhungry,stayfoolish
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有2个 )

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good! 2012-03-21 18:59:38
这个细胞还是比较好养的。但细胞刚开始复苏的时候,对细胞密度依赖比较大,长得慢的,你多等待几天,期间换液,慢慢等细胞密度70~80%才传代。
用FBS来养,可以把比例提高到12%,也看看你的培养液的配置时间多长,超过两个星期的可以重新添加谷氨酰胺。
状态不好的细胞,传代时可以离心。
消化时间很关键,如果担心消化过头,可以把胰酶稀释一下。
你的日子如何,你的力量也必如何!
6楼2012-03-21 10:24:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 说得很详细了! 2012-03-21 19:00:10
这个细胞我养过给您几个建议:
1、复苏后刚开始几天偶尔会出现长的慢情况(原因不明),但是成长1周左右(细胞密度达90%)传代后恢复状态。
2、确定没有污染后。很可能是细胞恢复期营养跟不足。更换DMEM培养基和hyclone胎牛血清(20%),等恢复生长后更换普通培养基和血清。
3、消化时间把握好,此细胞难消化,当消化时细胞变圆立刻弃去胰酶(含EDTA),然后利用残余胰酶继续消化,当周围变透明时吹打细胞。
4、死细胞会影响活细胞的成长,针对你所叙述情况,传代后4小时建议换液一次,并且最好30小时以上别动培养瓶,经常动培养瓶细胞会长不好的。
7楼2012-03-21 14:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

采妮830

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
G2细胞以及L2细胞,总的来说是非常好养的。状态好就算5%的FBS养都会张的。养不好又肯能冻存前就有问题。若是没有污染的话,传代的时候注意要用胰酶充分消化后再吹打下来,这样就避免机械损伤。而且据我的经验,吹得时候气泡多也是造成传代后漂浮细胞多的一个原因,所以尽量避免。希望对你有帮助,以后有问题多多交流~
10楼2012-03-21 20:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答问题! 2012-03-20 18:06:24
第一,血清是不是加足了,可以增加血清比例。第二,是不是有污染呢,这就需要楼主仔细对比下正常的细胞和自己养的细胞的形态了。查看细胞之间会不会有黑点、碎片,最后可以怀疑下是不是支原体污染。总能找到原因的
2楼2012-03-20 18:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouli_1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-21 08:05:24
楼主先查一下你这个细胞是不是本身就长的很慢,如果不是可能就是你自己不操纵不认真,导致污染,或者就是你的培养液 PBS有问题,多查查这方面的资料,细胞是用心培养的 这个不能懒 状态不好就要天天换液  祝楼主培养出好细胞!
3楼2012-03-20 19:21:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-03-20 18:00:16:
第一,血清是不是加足了,可以增加血清比例。第二,是不是有污染呢,这就需要楼主仔细对比下正常的细胞和自己养的细胞的形态了。查看细胞之间会不会有黑点、碎片,最后可以怀疑下是不是支原体污染。总能找到原因的

谢谢~·
stayhungry,stayfoolish
4楼2012-03-21 08:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouli_1991 at 2012-03-20 19:21:33:
楼主先查一下你这个细胞是不是本身就长的很慢,如果不是可能就是你自己不操纵不认真,导致污染,或者就是你的培养液 PBS有问题,多查查这方面的资料,细胞是用心培养的 这个不能懒 状态不好就要天天换液  祝楼主培 ...

谢谢~~
stayhungry,stayfoolish
5楼2012-03-21 08:36:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2012-03-21 14:43:43:
这个细胞我养过给您几个建议:
1、复苏后刚开始几天偶尔会出现长的慢情况(原因不明),但是成长1周左右(细胞密度达90%)传代后恢复状态。
2、确定没有污染后。很可能是细胞恢复期营养跟不足。更换DMEM培养基和 ...

谢谢,分享你们的经验,非常感谢
stayhungry,stayfoolish
8楼2012-03-21 18:11:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sxxuan at 2012-03-21 10:24:36:
这个细胞还是比较好养的。但细胞刚开始复苏的时候,对细胞密度依赖比较大,长得慢的,你多等待几天,期间换液,慢慢等细胞密度70~80%才传代。
用FBS来养,可以把比例提高到12%,也看看你的培养液的配置时间多长 ...

恩恩,谢谢你的经验分享
stayhungry,stayfoolish
9楼2012-03-21 18:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanny9900108 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +11 不知道叫什么! 2026-03-15 13/650 2026-03-16 15:10 by 了了了了。。
[考研] 材料专硕306英一数二 +4 z1z2z3879 2026-03-16 4/200 2026-03-16 13:53 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +4 素年祭语 2026-03-15 4/200 2026-03-16 09:42 by 闲人终南山
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 考研材料与化工,求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:14 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
请填处理意见