24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3517  |  回复: 11
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看

fanny9900108

金虫 (小有名气)

[求助] 细胞培养中的问题

Sample Text
请教高手,为什么我养的HEp G2老是生长的很慢,而且死细胞很多,一般传代后的新的培养瓶特别不容易长起来,上面培养液上老是飘着许多死细胞!!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 细胞生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

stayhungry,stayfoolish
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有2个 )

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good! 2012-03-21 18:59:38
这个细胞还是比较好养的。但细胞刚开始复苏的时候,对细胞密度依赖比较大,长得慢的,你多等待几天,期间换液,慢慢等细胞密度70~80%才传代。
用FBS来养,可以把比例提高到12%,也看看你的培养液的配置时间多长,超过两个星期的可以重新添加谷氨酰胺。
状态不好的细胞,传代时可以离心。
消化时间很关键,如果担心消化过头,可以把胰酶稀释一下。
你的日子如何,你的力量也必如何!
6楼2012-03-21 10:24:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 说得很详细了! 2012-03-21 19:00:10
这个细胞我养过给您几个建议:
1、复苏后刚开始几天偶尔会出现长的慢情况(原因不明),但是成长1周左右(细胞密度达90%)传代后恢复状态。
2、确定没有污染后。很可能是细胞恢复期营养跟不足。更换DMEM培养基和hyclone胎牛血清(20%),等恢复生长后更换普通培养基和血清。
3、消化时间把握好,此细胞难消化,当消化时细胞变圆立刻弃去胰酶(含EDTA),然后利用残余胰酶继续消化,当周围变透明时吹打细胞。
4、死细胞会影响活细胞的成长,针对你所叙述情况,传代后4小时建议换液一次,并且最好30小时以上别动培养瓶,经常动培养瓶细胞会长不好的。
7楼2012-03-21 14:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

采妮830

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
G2细胞以及L2细胞,总的来说是非常好养的。状态好就算5%的FBS养都会张的。养不好又肯能冻存前就有问题。若是没有污染的话,传代的时候注意要用胰酶充分消化后再吹打下来,这样就避免机械损伤。而且据我的经验,吹得时候气泡多也是造成传代后漂浮细胞多的一个原因,所以尽量避免。希望对你有帮助,以后有问题多多交流~
10楼2012-03-21 20:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答问题! 2012-03-20 18:06:24
第一,血清是不是加足了,可以增加血清比例。第二,是不是有污染呢,这就需要楼主仔细对比下正常的细胞和自己养的细胞的形态了。查看细胞之间会不会有黑点、碎片,最后可以怀疑下是不是支原体污染。总能找到原因的
2楼2012-03-20 18:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouli_1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-21 08:05:24
楼主先查一下你这个细胞是不是本身就长的很慢,如果不是可能就是你自己不操纵不认真,导致污染,或者就是你的培养液 PBS有问题,多查查这方面的资料,细胞是用心培养的 这个不能懒 状态不好就要天天换液  祝楼主培养出好细胞!
3楼2012-03-20 19:21:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-03-20 18:00:16:
第一,血清是不是加足了,可以增加血清比例。第二,是不是有污染呢,这就需要楼主仔细对比下正常的细胞和自己养的细胞的形态了。查看细胞之间会不会有黑点、碎片,最后可以怀疑下是不是支原体污染。总能找到原因的

谢谢~·
stayhungry,stayfoolish
4楼2012-03-21 08:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouli_1991 at 2012-03-20 19:21:33:
楼主先查一下你这个细胞是不是本身就长的很慢,如果不是可能就是你自己不操纵不认真,导致污染,或者就是你的培养液 PBS有问题,多查查这方面的资料,细胞是用心培养的 这个不能懒 状态不好就要天天换液  祝楼主培 ...

谢谢~~
stayhungry,stayfoolish
5楼2012-03-21 08:36:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2012-03-21 14:43:43:
这个细胞我养过给您几个建议:
1、复苏后刚开始几天偶尔会出现长的慢情况(原因不明),但是成长1周左右(细胞密度达90%)传代后恢复状态。
2、确定没有污染后。很可能是细胞恢复期营养跟不足。更换DMEM培养基和 ...

谢谢,分享你们的经验,非常感谢
stayhungry,stayfoolish
8楼2012-03-21 18:11:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanny9900108

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sxxuan at 2012-03-21 10:24:36:
这个细胞还是比较好养的。但细胞刚开始复苏的时候,对细胞密度依赖比较大,长得慢的,你多等待几天,期间换液,慢慢等细胞密度70~80%才传代。
用FBS来养,可以把比例提高到12%,也看看你的培养液的配置时间多长 ...

恩恩,谢谢你的经验分享
stayhungry,stayfoolish
9楼2012-03-21 18:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanny9900108 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 338求调剂 +3 我想上岸ii 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:59 by nepu_uu
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 5/250 2026-04-05 15:52 by jndximd
[考研] 286求调剂 +3 草木不言 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:40 by lbsjt
[考研] 求调剂 +7 xzghyuj 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:25 by oooqiao
[考研] 材料专硕306英一数二 +8 z1z2z3879 2026-03-31 8/400 2026-04-04 22:08 by hemengdong
[考研] 材料383求调剂 +5 郭阳阳阳成 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:06 by dongzh2009
[考研] 333求调剂 +9 阿科逸 2026-03-31 9/450 2026-04-04 18:25 by macy2011
[考研] 0710生物学336分求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-04 10:10 by kiyy
[考研] 26调剂 086003 +6 失活的细胞 2026-04-04 6/300 2026-04-04 09:50 by zhangdingwa
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 求调剂不挑专业 +3 xrh030412 2026-04-01 3/150 2026-04-03 14:40 by 氮气气气
[考研] 315求调剂 +6 顺理成张 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:04 by 百灵童888
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 13/650 2026-04-02 09:17 by olim
[考研] 0817化工学硕调剂 +11 努力上岸中! 2026-03-31 11/550 2026-04-01 20:30 by 赖春艳
[考研] 生物与医药考研调剂 +5 铁憨憨123425 2026-03-31 5/250 2026-04-01 18:01 by syh9288
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-31 6/300 2026-04-01 11:02 by 逆水乘风
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk¥
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
信息提示
请填处理意见