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wind8862

银虫 (小有名气)

[交流] 农杆菌转化水稻,竹子等单子叶植物的PROTOC0L

诸位达人:
    本人实验中想检测自己获得的基因的功能,现在想转化到竹子等禾本科植物中进行验证。但本实验室没有转化农杆菌转化禾本科植物的经验,还请高手赐教。越详尽越好!
    另外,请问大家的愈伤组织是如何培养出来的?

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不动则已,一动不动!
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wuweibewin

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wind8862(金币+10,VIP+0):能否把详细步骤发来? 1-16 18:08
我们实验室一直做农杆菌转化棉花和玉米,不过不是用的愈伤组织用的是茎尖转化法,操作简单,转化率在3%-5%左右!若需要可把基本步骤发给你!!
wuwei_hello@163.com
2楼2010-01-16 00:24:14
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wind8862

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wind8862 at 2009-12-30 15:11:
诸位达人:
    本人实验中想检测自己获得的基因的功能,现在想转化到竹子等禾本科植物中进行验证。但本实验室没有转化农杆菌转化禾本科植物的经验,还请高手赐教。越详尽越好!
    另外,请问大家的愈伤组织是 ...

我的邮箱abcman001@126.com
希望您能把详细步骤发给我,还有转化到看到结果需要多少时间呢?
谢谢
不动则已,一动不动!
3楼2010-01-16 18:09:22
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wuweibewin

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wind8862(金币+10,VIP+0):非常感谢,但我的材料是竹子,不会开花的。怎么能得到纯合的下一代呢? 1-18 11:39
有温室的话,得到第二代才是纯合体,也就是说至少得一个植物生活周期(至结实),才能得到纯和种子,种子在种下去就是纯合体了!
你的农杆菌质粒应该已经够建好了吧!
实验原理性 东西去《植物基因工程》上找,我们转化的步骤给你发到邮箱里去了!
wuwei_hello@163.com
4楼2010-01-16 19:13:25
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wuweibewin

金虫 (正式写手)

发到邮箱里去的论文详细的介绍了相关步骤及操作原因!你可以参考一下
wuwei_hello@163.com
5楼2010-01-16 19:14:10
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wind8862

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wuweibewin at 2010-1-16 19:13:
有温室的话,得到第二代才是纯合体,也就是说至少得一个植物生活周期(至结实),才能得到纯和种子,种子在种下去就是纯合体了!
你的农杆菌质粒应该已经够建好了吧!
实验原理性 东西去《植物基因工程》上找, ...

非常感谢。我的材料是竹子,不会开花结实,怎么得到纯合的下一代呢?
不动则已,一动不动!
6楼2010-01-18 11:40:25
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wuweibewin

金虫 (正式写手)

用茎尖转化后,通过报告基因鉴定后,确定转化为阳性后。可通过扦插、细胞培养等方式得到纯合株。
即转化成功后,通过PCR或报告基因证明阳性后,可将转化后长出的枝叶作为母本扦插和细胞培养,培养纯合株,不过扦插得到的有可能还是嵌合体,可以通过多代筛选,或许有效!
wuwei_hello@163.com
7楼2010-01-18 14:56:06
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wind8862

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wuweibewin at 2010-1-18 14:56:
用茎尖转化后,通过报告基因鉴定后,确定转化为阳性后。可通过扦插、细胞培养等方式得到纯合株。
即转化成功后,通过PCR或报告基因证明阳性后,可将转化后长出的枝叶作为母本扦插和细胞培养,培养纯合株,不过扦 ...

谢谢回答,估计我是做不到纯合那一天了,呵呵 快毕业了
不动则已,一动不动!
8楼2010-01-21 17:28:42
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shui_hanliu

金虫 (正式写手)

有链接方法没
9楼2011-03-17 09:13:01
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