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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么没有转化成功的菌依然可以在Amp+培养基上长呢？到底为什么呢？
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zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 为什么没有转化成功的菌依然可以在Amp+培养基上长呢？到底为什么呢？ 已有10人参与

我将连接好的T载体转化感受态DH5α，之后用载体上的通用引物扩增，总是无带，后来提取质粒，发现竟没有质粒，所以说明转化失败，但是转化失败菌为什么可以在含有抗生素的培养基上长呢？在这里请教各位高手了！！！
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认真是一种习惯
1楼 2012-09-04 21:47:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

irenescbg

金虫 (小有名气)
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-09-05 14:13:16
通常有两种可能，一种是Amp失效，如上所说，另外一种也比较常见，就是感受态细胞污染。我们实验室最近就是这样的，明明挑单克隆做感受态，谁知道居然就有Amp抗性菌的污染，直接把没转化的感受态细胞涂在Amp板子上一样长。后来跟师兄师姐们请教，原来是正常现象，大家都遇到过。避免的方法就是保存好你的Dh5a的菌种，不要从感受态划板子再做感受态。如果是Amp失效，换新的Amp，或者从其他实验室借一个板子试试。有的时候Amp容易失效，摇菌时间过长也会导致提不出质粒。如果是感受态污染，就重新做吧
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请赐予我正能量吧！加油！
4楼2012-09-05 09:22:38
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youyuxing

新虫 (正式写手)
★
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irenescbg说的真详细  又长进不小
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5楼2012-09-05 12:27:03
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普通回帖

apple712

银虫 (初入文坛)
★
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会不会是amp失效了呢？
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2楼2012-09-04 21:56:53
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米兰红黑魂

木虫 (初入文坛)
★
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试问楼主培养皿上的菌是成单个菌落的吗？如果全部长满，几乎平铺了涂布到的地方，说明是amp失效啦！如果是单个菌落的话，那原因还需要另外找了。
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人生如棋，我愿为卒，即便走的在慢，在艰难，你何曾看见我后退一步！！！
3楼2012-09-04 22:23:56
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天外客8316

木虫 (正式写手)
载体自连？
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坚持奋斗
6楼2012-09-05 14:00:11
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xudabin98

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你转化成不成功与在抗性板上能够生长有什么关系呀？有时肯定会有假阳性存在的，你得好好看看转化方面资料了...
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7楼2012-09-06 08:49:32
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zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xudabin98 at 2012-09-06 08:49:32
你转化成不成功与在抗性板上能够生长有什么关系呀？有时肯定会有假阳性存在的，你得好好看看转化方面资料了...

哦，确实，这方面知识欠缺啊
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认真是一种习惯
8楼2012-09-06 10:48:16
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hutingting

银虫 (正式写手)
★
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Amp和感受态失效否？这两个通过做对照没问题的话，那很可能就是载体 自连
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9楼2012-09-06 11:51:56
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王平阳

金虫 (正式写手)
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 天外客8316 at 2012-09-05 14:00:11
载体自连？

载体自连也应该可以提取质粒啊！
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没有做不到，只有想不到！
10楼2012-09-06 12:34:03
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