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铁杆木虫 (小有名气)

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[交流] 为什么没有转化成功的菌依然可以在Amp+培养基上长呢？到底为什么呢？已有10人参与

我将连接好的T载体转化感受态DH5α，之后用载体上的通用引物扩增，总是无带，后来提取质粒，发现竟没有质粒，所以说明转化失败，但是转化失败菌为什么可以在含有抗生素的培养基上长呢？在这里请教各位高手了！！！

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认真是一种习惯

1楼 2012-09-04 21:47:53

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irenescbg

金虫 (小有名气)

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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-09-05 14:13:16

通常有两种可能，一种是Amp失效，如上所说，另外一种也比较常见，就是感受态细胞污染。我们实验室最近就是这样的，明明挑单克隆做感受态，谁知道居然就有Amp抗性菌的污染，直接把没转化的感受态细胞涂在Amp板子上一样长。后来跟师兄师姐们请教，原来是正常现象，大家都遇到过。避免的方法就是保存好你的Dh5a的菌种，不要从感受态划板子再做感受态。如果是Amp失效，换新的Amp，或者从其他实验室借一个板子试试。有的时候Amp容易失效，摇菌时间过长也会导致提不出质粒。如果是感受态污染，就重新做吧