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黄大牛

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】转化过后为什么不长菌???? 已有5人参与

质粒上带有抗氨苄基因,转化过后涂氨苄板,带有目的基因的板上都没有长菌,而且郁闷的是在空载上居然长菌了。
   为什么啊???
    求助哪位达人解释下????
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aaalisu

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你确定实验过程中没有混淆
2楼2010-08-02 09:23:26
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liouwzh

木虫 (正式写手)

★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-02 11:13:29
说明连接效率太差,试试改善连接的方法。
3楼2010-08-02 09:24:09
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黄大牛

铜虫 (初入文坛)

没有混淆
  
连接是T4DNA连接酶16度过夜的
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
4楼2010-08-02 09:36:25
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louli

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-02 11:13:39
那空载体板子提取质粒之后又带吗?  那个没长可能是没转化进去啊 感受态是自己做的还是买的啊。要是自己做的话,转化效率低,而且中间注意的事情繁琐。
5楼2010-08-02 09:55:57
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wmq682

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-02 11:13:53
感受态有问题,转化效率太低,重新做吧,严格一点
6楼2010-08-02 10:02:58
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黄大牛

铜虫 (初入文坛)

感受态是买的,转化效率低的话,那么对照的也应该不长菌才是,但是对照长菌类,长的还挺多。
老板分析胶回收时乙醇没离干净可能影响连接,另外就是载体自连了,准备再用磷酸酶处理下再看看
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
7楼2010-08-02 11:09:46
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