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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助大肠杆菌电转化
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dingyi0311

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助大肠杆菌电转化 已有3人参与

我用的野生的大肠杆菌电转化，很多次了都没有转化出来，但是质粒转DH5a很容易，我想问下会不会是野生的大肠的表面荚膜的原因，怎么去掉荚膜。我的电转的步骤是水洗2次10%甘油洗两次。
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1楼 2011-04-12 11:15:43
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+6, EPI+1): 把相关帖子粘贴过来，更像专家了。 2011-04-12 13:23:49
我想知道你所说的大肠杆菌和DH5α有什么区别？DH5α也是大肠杆菌的一种。。。
我们一般转化10B.

其实转化这个东西论坛里面有很多人都说过了，不过我还是再跟你说一遍吧，
转化没有长出来单克隆原因很多
1：你的感受态细胞活性如何？
2：你的质粒又是如何？有无抗性片段，是空质粒还是重组的？
3：质粒和感受态细胞的比例是否合适？
4：转化之后摇床上摇了多久？
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-04-12 12:13:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-12 18:13:54
最主要的原因：
先看你的的野生型大肠杆菌里面的自带的质粒和你要转的质粒是否兼容吧。
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
3楼2011-04-12 17:15:47
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dingyi0311

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-12 12:13:29:
我想知道你所说的大肠杆菌和DH5α有什么区别？DH5α也是大肠杆菌的一种。。。
我们一般转化10B.

其实转化这个东西论坛里面有很多人都说过了，不过我还是再跟你说一遍吧，
转化没有长出来单克隆原因很多
1： ...

恩，我弄的大肠杆菌是野生的，上面有荚膜，DH5a上面是没有荚膜的，我做对照的时候DH5a是能够转进去的，但是野生菌用同样的方法转不进去我的质粒，我的质粒是自己改造的
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4楼2011-04-13 15:51:51
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dingyi0311

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-12 17:15:47:
最主要的原因：
先看你的的野生型大肠杆菌里面的自带的质粒和你要转的质粒是否兼容吧。

谢谢啊，我小提质粒没有提出来，明天准备大提质粒试试
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-13 15:52:30
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