24小时热门版块排行榜    

查看: 3455  |  回复: 8

clx@6016

金虫 (小有名气)

[交流] 大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题 已有6人参与

各位虫友好,想请教下大肠杆菌电转化方面的一些问题,希望各位虫友多多指教 .最近一直在做电转化,可每次制备的电转化感受态细胞都不行,最开始做的还可以达到10的六次方,可最近两次做的,貌似做好的电转化感受态细胞里面的菌体全都死了?是为什么呢?有人有遇到这种情况的吗?还望各位网友多多指教,感激不尽哈!急急急!!!
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuangzi8761

银虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
把你的步骤说说呗
2楼2011-11-26 17:32:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenchuan24891

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
zhang8826857(金币+3): 鼓励新虫,鼓励继续帮助lz解决问题 2011-11-27 10:57:54
你应该自己好好去按文献的方法检查一下,大多数情况下是自己的失误造成的。如果还是这样的话,请你把你做的步骤给大家看一下。
3楼2011-11-27 09:59:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clx@6016

金虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by clx@6016 at 2011-11-21 11:12:34:
各位虫友好,想请教下大肠杆菌电转化方面的一些问题,希望各位虫友多多指教 .最近一直在做电转化,可每次制备的电转化感受态细胞都不行,最开始做的还可以达到10的六次方,可最近两次做的,貌似做好的电转化感受态 ...

先把新鲜划好的菌接到含有Amp的3mlSOB试管中,30度过夜培养,第二天以1:50的接种量转接到50ml含有Amp的SOB中(转接之前加入MgCl2),30度摇菌2小时,OD600为0.1左右,然后加入L-阿拉伯糖诱导35分钟,OD600为0.3-0.4左右。5000转,4度离心10分钟,收菌。然后用10%甘油重悬3次,5000转,4度离心10分钟。最后将菌体浓缩500到800倍后保存在10%甘油中。然后立刻电转!如果有什么问题,还请各位前辈多多指教哈!
4楼2011-11-28 21:22:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clx@6016

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenchuan24891 at 2011-11-27 09:59:56:
你应该自己好好去按文献的方法检查一下,大多数情况下是自己的失误造成的。如果还是这样的话,请你把你做的步骤给大家看一下。

恩,谢谢哈!
5楼2011-11-28 21:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
送鲜花一朵
电转的话应该按照电转仪的说明来制备感受态吧,我们买的仪器有很多菌的protocol和建议电转条件
6楼2012-01-10 09:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
其实热击的方法转化效率就应该足够了。。。电击转化,要注意电击时,是否出现火花,如果有火花,效率就不敢保证了。。。
7楼2014-04-09 20:46:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wsws987

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
制作过程尽量轻柔,而且要基本都在冰上操作
8楼2018-07-26 19:09:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diy患者

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
氯化钙都能达到10的6次方,甚至7次方。
9楼2018-07-28 09:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 clx@6016 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 伙伴们,祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +3 Liwangman 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:16 by JourneyLucky
[基金申请] 国自科面上基金字体 +4 iwuli 2026-03-12 5/250 2026-03-15 17:07 by 风云无泪
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 化学工程321分求调剂(南京工业,浙江工业) +3 大米饭! 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:34 by JourneyLucky
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见