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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题
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clx@6016

金虫 (小有名气)

[交流] 大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题 已有6人参与

各位虫友好，想请教下大肠杆菌电转化方面的一些问题，希望各位虫友多多指教 .最近一直在做电转化，可每次制备的电转化感受态细胞都不行，最开始做的还可以达到10的六次方，可最近两次做的，貌似做好的电转化感受态细胞里面的菌体全都死了？是为什么呢？有人有遇到这种情况的吗？还望各位网友多多指教，感激不尽哈！急急急！！！
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dnaxxx

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1楼 2011-11-21 11:12:34
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
把你的步骤说说呗
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2楼2011-11-26 17:32:10
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chenchuan24891

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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zhang8826857(金币+3): 鼓励新虫，鼓励继续帮助lz解决问题 2011-11-27 10:57:54
你应该自己好好去按文献的方法检查一下，大多数情况下是自己的失误造成的。如果还是这样的话，请你把你做的步骤给大家看一下。
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3楼2011-11-27 09:59:56
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clx@6016

金虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by clx@6016 at 2011-11-21 11:12:34:
各位虫友好，想请教下大肠杆菌电转化方面的一些问题，希望各位虫友多多指教 .最近一直在做电转化，可每次制备的电转化感受态细胞都不行，最开始做的还可以达到10的六次方，可最近两次做的，貌似做好的电转化感受态 ...

先把新鲜划好的菌接到含有Amp的3mlSOB试管中，30度过夜培养，第二天以1:50的接种量转接到50ml含有Amp的SOB中(转接之前加入MgCl2)，30度摇菌2小时，OD600为0.1左右，然后加入L-阿拉伯糖诱导35分钟，OD600为0.3-0.4左右。5000转，4度离心10分钟，收菌。然后用10%甘油重悬3次，5000转，4度离心10分钟。最后将菌体浓缩500到800倍后保存在10%甘油中。然后立刻电转！如果有什么问题，还请各位前辈多多指教哈！
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4楼2011-11-28 21:22:16
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clx@6016

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenchuan24891 at 2011-11-27 09:59:56:
你应该自己好好去按文献的方法检查一下，大多数情况下是自己的失误造成的。如果还是这样的话，请你把你做的步骤给大家看一下。

恩，谢谢哈！
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5楼2011-11-28 21:34:53
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
电转的话应该按照电转仪的说明来制备感受态吧，我们买的仪器有很多菌的protocol和建议电转条件
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6楼2012-01-10 09:36:47
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不爱做实验

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实热击的方法转化效率就应该足够了。。。电击转化，要注意电击时，是否出现火花，如果有火花，效率就不敢保证了。。。
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7楼2014-04-09 20:46:15
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wsws987

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
制作过程尽量轻柔，而且要基本都在冰上操作
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8楼2018-07-26 19:09:57
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diy患者

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
氯化钙都能达到10的6次方，甚至7次方。
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9楼2018-07-28 09:34:26
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