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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】电转化问题
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xucan0901

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】电转化问题 已有2人参与

我做电转化时，为何转提取的纯质粒时，即使稀释1000倍也长很多菌落。
但是当转化连接产物时，就一个菌落也不长了，我重复了几次都是这样。后来师兄
说要把连接产物过柱纯化，但是我做了也是不长，不知道为何？请教高手!
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1楼 2010-07-23 17:52:05
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-24 06:19:06
纯质粒和连接产物在转化中是有不同的。例如，纯质粒在转化中完全可以不摇菌的。
你换个角度来思考问题，大概算算你纯质粒和连接产物中各有多少质粒分子了：
你可以都以100ng来算一下有多少分子了。你的连接效率好的情况下，也就1/1000了。自然你就理解为什么连接产物效率下降了。
连接产物如果转不出来，大多数情况下是连接自身的问题。也就是说，没有连接上，或者说连上的量太少。检查一下你的酶切等连接前的过程和你的连接酶是否正常
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2楼2010-07-24 00:19:34
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xucan0901

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-07-24 00:19:34:
纯质粒和连接产物在转化中是有不同的。例如，纯质粒在转化中完全可以不摇菌的。
你换个角度来思考问题，大概算算你纯质粒和连接产物中各有多少质粒分子了：
你可以都以100ng来算一下有多少分子了。你的连接效率 ...

问题是至少会长一些假阳性的吧，我同样的连接产物用化学转化就长了一些假阳性的 ，而且这电转化感受态的转化效率比化转的效率要高，这我用纯质粒比较过了的。
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3楼2010-07-24 08:56:25
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xucan0901 at 2010-07-24 08:56:25:

问题是至少会长一些假阳性的吧，我同样的连接产物用化学转化就长了一些假阳性的 ，而且这电转化感受态的转化效率比化转的效率要高，这我用纯质粒比较过了的。

呵呵，这个不一定，没有假阳性那是好事啊
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4楼2010-07-24 09:00:04
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