| 查看: 3201 | 回复: 8 | ||||
[交流]
制作超级电转感受态注意事项 已有6人参与
|
|
Q高效率感受态细胞的制备注意要点 2010-05-20 22:04 来源：互联网 点击次数： 1034 关键词： 感受态细胞 制备 现在大肠杆菌转化效率最高的要数电转化，可达到1010，但是操作起来比较麻烦。要想又简单，又能有较高的转化效率，最好的莫过于1990年《Gene》上刊登的由Inoue H.等提出的高效感受态的制备与转化方法。 根据实验室的实际情况，我们将其稍作修改，做成了GLP文件，但其中仍有许多可改进或需要注意的地方，其中有一些对普通感受态效率的提高也有一定的帮助。 1、所用器具的洁净程度。这一点非常重要，是所有与感受态有关的方法与文章上必讲的，毋庸置疑。 2、培养基的装量。培养基的装量是很重要的，这关系到菌体生长过程中的能量代谢问题，是有氧还是无氧生长。厌氧生长出来的菌体是做不出效率高的感受态的。建议装量不要高于此值：培养基体积/三角瓶容量=100ml/500ml，50ml/250ml。 3、培养基的pH值。这里讲的pH值并非单指配制或灭菌后的pH值，而且还包括整个摇瓶结束后的pH值。一般来说，接种前的pH值在6.8-7.2。等菌摇好后，可以测一下pH值，不要低于6.0，最好在6.5以上。这表示菌体的代谢为有氧代谢，生长状态良好，按要求做，肯定效率不低。 4、培养后的OD值。其实这是一个非常重要的参数，只是当OD值大到一定的程度后，菌体要保持对数生长已经不太可能，因此很多指导方法上强调OD不得大于 0.6、0.8等等。同时，OD值大时菌体总量大，感受态绝对数量要大一点。因此需要在OD值的两方面影响中找一个平衡点。 5、培养基中的各种离子。经验证明，当培养基中存在一定量的Mg2+离子时，该方法制得的感受态要相对较高。在制备普通感受时，使用20mM MgCl2做为培养基的添加物，在感受态收获之前20-30分钟加入，会收到很好的效果。 6、培养温度。文献及经验告诉我们，较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了Inoue的高效感受态制备方法，它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一个非常理想方法。 7、此外文献报道，在保存感受态时，DMSO要比甘油的效果要好，它会使感受态的效率增加。 8、液氮速冻也会使感受态的效率提高，因此推荐用液氮速冻感受态，然后保存于超低温冰箱内。至于在液氮中保存12小时以后再转入超低温冰箱，这点未做实验，只是一种感觉，第一次这样做了，没问题，以后就照此办理而已。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生物学资料 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有265人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 电转感受态用多大电压
已经有7人回复
- 旋转蒸发仪工作注意事项
已经有57人回复
- 大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点
已经有55人回复
- 大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题
已经有8人回复
- 一个关于感受态转化效率的问题
已经有11人回复
- 目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌……
已经有7人回复
- 急求酿酒酵母的电转感受态制备方法和转化方法
已经有13人回复
- 【求助/交流】质粒的转化体积为什么不能超过感受态的十分之一
已经有16人回复
- 【求助/交流】质粒转化枯草杆菌感受态原理
已经有4人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌感受态制备及转化中的问题
已经有3人回复
- 做电转感受态时有染菌的吗
已经有15人回复
- 电转化注意事项
已经有14人回复
- 英文论文写作、投稿过程中的注意事项（转）
已经有8人回复
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16332.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2012-04-25 18:58:55
十口心思
木虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2417.9
- 散金: 64
- 帖子: 261
- 在线: 152.7小时
- 虫号: 347022
- 注册: 2007-04-15
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
3楼2012-04-26 00:44:34
4楼2012-04-26 08:46:40
hyacinth326
金虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 2003.3
- 散金: 304
- 红花: 4
- 帖子: 394
- 在线: 1338.8小时
- 虫号: 1502977
- 注册: 2011-11-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
5楼2012-04-26 09:27:03
十口心思
木虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2417.9
- 散金: 64
- 帖子: 261
- 在线: 152.7小时
- 虫号: 347022
- 注册: 2007-04-15
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
6楼2012-04-26 11:13:00
 |
7楼2012-04-27 20:58:54
8楼2015-02-03 10:01:49
9楼2016-03-18 15:43:03
20