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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一个关于感受态转化效率的问题
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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)

[交流] 一个关于感受态转化效率的问题

无论是电转还是化学转化，多少的转化率才是达到了理想值，既是涂板培养12小时后菌落数量达到多少？我之前做得都是化学法培养2天也就出那么3几个，最近做了超级感受态，也用了电转，12小时之后就能长出来8个了，老师还嫌感受态转化效率低，求解。《分子克隆》上说电转的效率有10的7次方~10的8次方,那么这个7次方8次方是怎么得到的？在平板上是个怎么样的表现？
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1楼2011-09-05 14:07:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

linqin1029

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
如果你要确定感受态细胞的转化效率，可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中，取一部分转化的细菌，涂布到选择培养基上，可用菌落生长单位/μg DNA，按下面的方法计算感受态细胞的转化效率。计算公式：转化效率＝产生菌落的总数/铺板DNA的总量。

      例如，取1μl（0.1ng/μl）完整的质粒转化100μl的感受态细胞。向转化反应液中加入900μl培养液，让细菌恢复一小段时间，取100μl铺板.培养过夜，产生1000个菌落。转化0.1ng DNA，用SOC稀释到1000μl后，取1/10涂平板，则涂平板共用0.01ng DNA 质粒，所以转化率＝1000克隆/0.01ng DNA =105cfu/ng=10的8次方cfu/μg。

       一般转化效率1×10的6次方cfu/μg DNA可满足普通的亚克隆实验；1×10的7次方cfu/μg DNA用于作更复杂的亚克隆，有限量的DNA的转化，T-克隆实验；构建文库和突变要求用的转化的效率为>1×10的8次方cfu/μg DNA。
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冰风颤木
11楼2011-09-09 10:14:13
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普通回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★
造血干细胞(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): 有时候还不是想稳点 2011-09-06 07:37:24
有时候长太多并不是一件好事情。。。。十几个，几个就OK了。。。
哪怕只有一个，只要对就OK！！！
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2楼2011-09-05 15:50:43
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linlingdaiyu

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5): 鼓励新虫交流 2011-09-06 07:37:42
我的感受态效率都挺高的啊
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3楼2011-09-05 21:38:21
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475502411

铜虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-06 07:37:52
是啊，只要有菌落就好，没必要那么多，我做的转化效率挺高的，我同门做的转化率就比较低，但是救过是一样的啊！
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4楼2011-09-05 22:14:58
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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)
西瓜: 一般可以看1ng质粒（你可以用本实验室最常用的那个质粒）转化后可以得到多少菌落。你第一次做觉得菌落很多数不过来，第二次做就可以稀释10倍、100倍或者更高。数的时候，可以把平板分成4份或者更多（前提是涂布比较均匀），然后只数其中一份的菌落数。最后计算下就ok了。 2011-09-08 22:10:22
引用回帖:
3楼: Originally posted by linlingdaiyu at 2011-09-05 21:38:21:
我的感受态效率都挺高的啊

问题是：多少算高？那个10的7-8次方在板上怎么看，求解
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5楼2011-09-06 09:13:13
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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天使托 at 2011-09-05 15:50:43:
有时候长太多并不是一件好事情。。。。十几个，几个就OK了。。。
哪怕只有一个，只要对就OK！！！

我已经做出来了，但老师说转化效率不行，一直在重复做感受态
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6楼2011-09-06 09:14:33
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sfb1020

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-09-09 07:55:25
转化效率高的可以长满满一板菌，连单菌落也挑不出来。要是那种转化效率高的涂板的时候就要少涂点
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7楼2011-09-06 09:42:10
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wanhscn

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 造血干细胞 at 2011-09-06 09:14:33:
我已经做出来了，但老师说转化效率不行，一直在重复做感受态

会不会老板对你要求期望要比其他人高。一般老板对不同学生要求不同！
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8楼2011-09-06 10:52:56
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荆荆

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励经验交流 2011-09-09 07:55:45
我师兄曾说把平板平分成十个左右的扇形，粗略数一下单菌落数以此估计平板单菌落数，菌落也不能长太多，以免挑取时困难。
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9楼2011-09-08 21:48:06
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 造血干细胞 at 2011-09-06 09:13:13:
问题是：多少算高？那个10的7-8次方在板上怎么看，求解

10的7-8次方一般是指转化1ng的pUC-19质粒，在板子上长的菌落数达到10的7-8次方。转化的时候，最后一步不离心后涂板，可以取出的菌液稀释，而不进行离心，然后涂板。然后可以计算你原先转化成功的感受态细胞有多少。
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10楼2011-09-09 00:31:30
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by linqin1029 at 2011-09-09 10:14:13
如果你要确定感受态细胞的转化效率，可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中，取一部分转化的细菌，涂布到选择培养基上，可用菌落生长单位/μg DNA，按下面的方法计算感受态细胞的转化效率。计算公式：转化效率＝产 ...

回复的很好 谢谢了啊 学习了啊
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12楼2013-06-10 16:15:11
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