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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于转化的问题？
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王玉民

新虫 (小有名气)

[求助] 求助关于转化的问题？

请问大家，连接之后转化时，热击的时间使30s好还是90s好？复苏时摇床的转速和时间多少最合适？
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心晴
1楼 2011-10-20 09:58:01
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zhunning

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

很多人一般会选择90S，复苏的话选择37℃，不超过200rpm，作个参考
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2楼2011-10-20 10:23:20
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zhunning

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 热心哦 2011-10-20 18:27:33
复苏的时间在60min左右
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3楼2011-10-20 10:24:39
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王玉民

新虫 (小有名气)
西瓜: 买的是公司的感受态的话，以说明书为准吧，这个是最权威的了。转化的其他过程可能有问题，不妨详细描述下以利于大家分析。 2011-10-20 18:26:47
但是invitrogen的说明书上写的是30s转速是225rpm。我用这个方法长了几点才长出来一点，用90s150rpm的却怎么都长不出来。
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心晴
4楼2011-10-20 10:27:29
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助回帖 2011-10-24 10:23:39
热激时间50s到90s的时间都用过，不过我做过很多次热激，大都是60s左右即可。复苏的时间一般是150rpm，1hr左右
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5楼2011-10-20 10:29:38
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zhunning

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

说明书上提供的也仅作个参考，最好是问问自己的老师或是师兄姐，选择最优的条件，毕竟很多仪器试剂条件什么的还是有点差别
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6楼2011-10-20 10:33:02
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-24 10:24:06
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王玉民 at 2011-10-20 10:27:29:
但是invitrogen的说明书上写的是30s转速是225rpm。我用这个方法长了几点才长出来一点，用90s150rpm的却怎么都长不出来。

我还没有用过你说的那个，一般用TaKaRa与promega的，也看过别的，就是没有印象你说的那2个数字啊。你们实验室有别人跟你用同样的感受态做热激吗？热激的温度是42度，用水浴
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7楼2011-10-20 10:37:17
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三目

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by peace12039088 at 2011-10-20 10:37:17:
我还没有用过你说的那个，一般用TaKaRa与promega的，也看过别的，就是没有印象你说的那2个数字啊。你们实验室有别人跟你用同样的感受态做热激吗？热激的温度是42度，用水浴

热击不一定用水浴的，其实干热更好
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8楼2011-10-20 10:41:39
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三目

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得吧，那个感受态也有关系，请问你们这个感受态是自己做的（做好保存了多久），还是生物公司买的？
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9楼2011-10-20 10:43:01
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 剪切力的问题第一次听说，有没有来源呀，学习下.不过不涂板的话不容易得到单菌落吧。 2011-10-20 18:29:09
转化 冰上融化感受态 加入DNA后用枪混匀后置冰上 30min 其间勿动  42度热激90s 冰上放置2min冷却 加入1ml LB培养基37度恢复1h 涂布平板 恢复时转速随意调当然切勿过高 不转也行  板子张的不好不一定全是转化的原因 可能因为涂布板子时出的问题 建议直接将恢复后的菌液倒在平板上超净台吹干后倒置培养 这样就避免了涂布时的剪切力对菌照成的损伤
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冷风过心变热
10楼2011-10-20 10:47:01
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