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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于转化的问题？
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王玉民

新虫 (小有名气)

[求助] 求助关于转化的问题？

请问大家，连接之后转化时，热击的时间使30s好还是90s好？复苏时摇床的转速和时间多少最合适？
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心晴
1楼 2011-10-20 09:58:01
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peace12039088

银虫 (小有名气)

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★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助回帖 2011-10-24 10:23:39
热激时间50s到90s的时间都用过，不过我做过很多次热激，大都是60s左右即可。复苏的时间一般是150rpm，1hr左右
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5楼2011-10-20 10:29:38
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-24 10:24:06
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王玉民 at 2011-10-20 10:27:29:
但是invitrogen的说明书上写的是30s转速是225rpm。我用这个方法长了几点才长出来一点，用90s150rpm的却怎么都长不出来。

我还没有用过你说的那个，一般用TaKaRa与promega的，也看过别的，就是没有印象你说的那2个数字啊。你们实验室有别人跟你用同样的感受态做热激吗？热激的温度是42度，用水浴
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7楼2011-10-20 10:37:17
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peace12039088

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 三目 at 2011-10-20 10:41:39:
热击不一定用水浴的，其实干热更好

说实话，做了无数次的热激，还没有尝试过干热，也没有人建议过，不过以后可以尝试，谢谢提醒。只是感觉水浴温度比干热要恒定些。你为什么说干热更好呢，做过对照试验？
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12楼2011-10-20 11:14:07
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peace12039088

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2011-10-22 04:08:58:
水浴和干热都用过，挺好的
这不是主要问题，只要结果好，那才是真的好
偶用42度45-50秒

结果好，才是真的好！
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18楼2011-10-24 10:10:33
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